文定王后尹氏（朝鲜语：문정왕후 윤씨，1501年－1565年），是朝鲜王朝第十一代君主朝鲜中宗的第二继妃、第十二代君主朝鲜仁宗李峼的养母、第十三代君主朝鲜明宗李峘的生母。

尹氏是坡山府院君尹之任与全城府夫人全义李氏之女，是小尹派首领尹元老之妹、尹元衡之姐，大尹派首领尹任的远房侄女。由于家道中落，尹氏虽然是两班贵族子女，但生活与平民无异。史载她“有学识”，在遭母丧时曾责备在丧中嬉笑的哥哥，并严格遵守三年丧礼。

中宗十年（1515年），尹任之妹章敬王后在生下后来的仁宗李峼之后因产后病逝。

中宗十二年（1517年），尹氏被拣择为中宗的第二继妃（第三任王后），七月十九日中宗亲迎于太平馆。七月二十日，文定王后在宣政殿接受内外命妇朝贺，宣政殿是国王接见群臣的地方，因此此举被批评为失礼，并被视为文定王后干政的征兆。

中宗二十六年（1531年），文定王后借世子派（尹任与金安老一派）的力量肃清最后的勋旧派代表沈贞，其后世子派专权。中宗二十九年（1534年）文定王后生下庆原大君李峘。其时金安老以“保护东宫”为名，欲废黜文定王后，再加上他与尹元老等“有世嫌”，便设法流放尹元老兄弟。文定王后的亲戚尹安仁、尹元老打算除掉金安老，中宗也对金安老深恶痛绝，在尹任的协助下，大司宪梁渊弹劾金安老并诛杀了他，时为丁酉年（1537年）。

丁酉年（1537年）以后，朝廷之间就有大、小尹之说。文定王后一派以尹元老、尹元衡为主，与同宗的尹任一派因王位继承问题相斗，是为大尹与小尹之争。初时尹任一派占上风，士林派儒士亦卷入大尹与小尹的斗争中。

1544年，中宗去世，世子即位，是为仁宗，尹氏进位王大妃。大尹派得势。然而仁宗在位不到一年就去世，官方记载仁宗因为父王去世后太悲伤而得病，但民间有流言谓他被继母文定王后毒杀。

仁宗去世后，文定王后之子、十二岁的庆原大君即位，是为明宗。尹氏晋封大王大妃，仁宗王妃朴氏封王大妃。文定王后垂帘听政，尹元老、尹元衡等逐渐得势专权。

明宗元年（1545年），在尹元衡之妾郑兰贞的鼓动下，文定王后下密旨于尹元衡，尹元衡遂令其同党李芑、郑顺朋、许磁、林百龄等人诬告尹任及柳灌等谋反，结果尹任等人被赐死。大尹派倒台，史称“乙巳士祸”。此后，以尹元衡为首的小尹派专横骄肆日盛。又陆续发生良才驿壁书事件（丁未士祸）、安名世狱事、李洪男狱事等政治风波。

明宗二年（1547年）一月为尹氏上尊号“圣烈”，同年九月再上尊号“仁明”。

明宗九年（1553年），年满20岁的明宗开始亲政，开始重用其王妃仁顺王后的舅父李梁，文定王后一派势力开始减弱。但是文定王后仍然干涉明宗的朝政运作，明宗打算动尹元衡时，就会有宦官密报给文定王后，然后文定王后就会责备明宗：“非我与元衡，上安得有今日乎？”明宗不敢忤逆，因此尹元衡地位屹立不摇。

文定王后对于僧人普雨（1515－1565）也宠爱有加，甚至要授予兵曹判书之职，引发与士大夫的磨擦。此后，文定王后与僧人普雨的关系更加令人怀疑。

明宗二十年（1565年）四月六日，文定王后逝于昌德宫昭德堂，享年六十五岁（虚岁），葬泰陵。谥号“文定”（慈惠爱民曰文，安民大虑曰定），全称“圣烈仁明文定王后”。其后僧人普雨被流放济州岛，随后被杀；佛教则更加为士人排斥。不久，尹元衡与其妻郑兰贞被削爵流放。

《朝鲜王朝实录》对历代王后都极尽赞美之能事，唯独对文定王后却是贬多于褒，评价甚至有些不堪，如史臣对她一生的评价是：

尹氏性刚狠，能解文字。仁庙在东宫，尹氏忌之。其弟元老元衡辈与章敬之弟尹任有隙，交构两间，遂有大小尹之说。是时，人皆以仁庙之孤危为忧。中庙宾天，仁庙事尹氏极其孝，而三朝之际，每发怨言，至曰：“愿官家活我门。”仁庙闻之，闷郁柴瘠之余，仍致忧伤，以至大渐。及上即位，当时诸公虞其刚狠，必害于国，至不欲使临朝。盖不量其时势之不得已，而适以速祸。未几遽起大狱，向之扶护仁庙者，皆指为逆贼。噫！如尹任者，见怒于小尹久矣。无知武夫，或怀不自安之心，而反形亦未著。至如柳灌，素称清直，心乎王室，亦何罪也？盖后积憾于前，构祸于后，李芑辈又从而赞成之，其祸连延迄十余年而未已。终至血肉士林，斩伐殆尽，言之可为于悒。厥后崇奉佛事，靡有纪极，内外帑廪，空竭无余。公行贿赂，横夺民田。内需奴婢，横肆诸道；叛主臧获，如萃渊薮。与其弟元衡专擅于中外，二十年间，朝政浊乱，廉耻扫地，生民困悴，国脉斫丧，宗社之不亡，幸尔！况靖陵安厝几二十年，而恶其与章敬同兆，遂至迁动，独何忍哉？且自谓有扶立之功，时或谓上曰：“汝非我，何以有此？”少不如意，辄肆叱咤，有同民家壮母之待小子。上性至孝，奉承无违，然时于后苑僻处，为之涕泣，或至失声。上之得患心热，亦以此夫！然则妃可谓社稷之罪人也。《书》曰：“牝鸡之晨，惟家之索”，尹氏之谓也。

文定王后垂帘听政的8年间，士人流血之余，国库空荡，百姓饥饿，盗贼四起。尤其是起于黄海道和京畿道的白丁之义贼——林巨正活动猖獗。

宗教上，佛教复兴，特别是禅宗和教宗的复活，僧科和度牒制再度实施。僧人普雨因为受到文定王后的信任而出任奉恩寺禅宗住持与奉先寺教宗住持，使得佛教势力获得拓展。

文定王妃，自少贞静，端一孝敬，慈惠聪明，出人意表。春秋十一岁，丁母夫人忧，行素三年，凡察丧礼，似同成人。事考府院君，衣食孝养，一如母夫人生时；抚养年幼同气，亦同於母夫人生时，故宗族莫不称赞。岁在乙亥孝惠公主【章敬王后女也。下嫁延城尉金禧】早失所（时）〔恃〕，至於公主子弟，【公主只有一女，文定王妃，以其兄元老之子百源妻之。】凡事一依公主之礼。庚寅夏，贞显王妃未宁，适於其时，方娠敬显公主，【下嫁灵川尉申檥。】而昼夜侍侧，暂不懈弛。及贞显王妃疾亟，文定王妃以诞生公主七日之内，不得行步，安坐於袱上，使内人擧之入侍，则贞显王妃敎曰：“中宫忘身如此，吾疾似愈矣。”及其昇遐，哀痛罔极，行素三年。内间凡事及祭祀，克尽礼规。壬辰年间，中庙偶得大肿，累朔辛苦之时，不离侍疾，动静得宜。在坤位二十八年，少无怠於国母之道。敬事中庙，如君臣礼。一日两殿御便殿，仁庙侍侧，妾【王大妃自称。】亦忝殿末，而中庙论难历代治乱兴亡之迹、我朝政治之事。文定王妃曰：“赏罚不当，则虽十皇帝，不能治也。愿自上须光明正大，进君子、退小人，此治乱之大关也。”中庙喜答曰：“此言至当。”常时如是论难，内助政治，无所不用其极。抚恤後宫，情若昆弟。逮於甲辰仲冬，中庙宾天，攀号莫及。非进香名日，则例为躬行别祭。每年中庙诞辰，则别造衣襨，亦躬行祭，而後宫王子王孙，均养益厚，终始如一，故内外莫不感荷天恩，常祝万寿。不意昇遐，人皆伤恸罔极。常时天性俭素，不喜奢华，动遵礼法，常为先王守陵官及中庙朝元勋之家，不废赐送，厚待不弛。每念国家无疆之寿，黎民得所安乐，焚香祝天，虽寒暑不废。祝曰：“天鉴孔昭，必得所欲。”为国诚意，极尽如此。平日敎曰：“释敎乃是异端，所当拒绝。但自祖宗朝以来，不能顿绝，吾何独废乎？吾以此事，有愧於主上，而是亦予为国诚意之一端。”云。

大行大王大妃，天质英明，圣度刚正，博览学问，闺门有法，内庭严肃。虽一品驸马，狂悖得罪，则黜外不惜。【此盖指灵川尉申檥安置事也。】人莫不服。自丁丑年册封之後，配先考三十年，克遵妇道，终始诚敬。待仁庙亦尽和意，虽或有奸凶交乱之言，能为鎭静。接宫嫔，合於情礼。甲辰冬，中庙宾天之後，哀毁过礼。乙巳，仁庙宾天，痛悼亦切。当寡躬嗣服之初，三凶【尹任、柳灌、柳仁淑。】罪恶渐极，御景福宫忠顺堂，垂帘议于公卿，克除奸凶，再安宗社。初上圣烈徽号，加上仁明二字。摄政九载，政治淸明。癸丑流火之月，归政于寡躬。常时每敎寡躬，以辨贤邪、抑贪风、去民瘼、安国家、谆谆不已。癸丑暮秋，景福宫灾，钦赐诰命，竝被烧烬。戊午年，遣使奏请，皇帝卽允，顺付再下。虑僧徒无统，议大臣，复立两宗。【大臣，沈连源、尙震也。○当垂帘发政之日，议复立两宗之事，阿謟不达，而无一言面谏其不可。至於下问之际，正値纳约之时，而震也非徒不进言，又从以愞顺之辞，遂复禅科。】念中庙靖陵之兆，似不尽美，壬戌之秋，迁卜于宣陵之旁。癸亥九月，惊恸顺怀之变，初冬移御于昌德宫东宫。自甲子年，寡躬多疾，以诚护养，仰赖罔极之恩。今年暮春，偶因感冒之证，日渐弥留，百药不效。孟夏初七，移御于昌德宫别堂，巳时昇遐。春秋六十五。呜呼，痛哉!

仍传于政院曰：“罔极之中，心緖茫茫，文似烦乱，制志者，可改成也。此外，朝廷若有闻见之事，亦当书示于制志官。”

高祖：尹士昕

曾祖：尹继谦

祖父：尹顼

外祖：李德崇

父亲：坡山府院君尹之任（1475－1534），本贯坡平，字重乡，纯忠积德辅祈功臣，赠领议政，坡山府院君，谥号靖平；尹之任原本任职掌苑署别提，中宗十二年（1517年）三月，长女经过拣择礼确定成为中宗的继妃，尹之任晋升敦宁府都正（正三品堂上官），同年五月晋升为领敦宁府事（正一品）；中宗十四年兼任五卫都总（正二品），中宗十七年受封坡山府院君。

母亲：全城府夫人全义李氏（1475－1511），李德崇之女。

婆母兼远房姑祖母：贞显王后尹昌年（1462－1530），本贯坡平尹氏；朝鲜成宗的第二继妃，朝鲜中宗李怿生母，铃原府院君尹壕与延安府夫人田氏之女。

尹元凯（1493年－1535年）

尹元亮（1495年－1569年）

尹元弼（1496年－1547年）

尹元老（？－1547年），尹元衡与文定王后之兄；1545年与大尹派政争失败被流放，之后与弟弟尹元衡权力斗争失败，1547年被赐死。

尹元衡（？－1567年），尹之任的第五子，小尹派代表人物。

朝鲜中宗李怿（1488－1544）

懿惠公主李玉蕙（1521－1564），中宗嫡次女，下嫁淸原尉韩景禄（1520－1589，韩承权之子，为睿宗时期的大臣韩确之后代）。

孝顺公主李玉莲（1522－？），中宗嫡三女，下嫁绫城君具思颜（1523－1562，靖国功臣具寿永之孙）。

敬显公主李玉贤（1530－1584），中宗嫡四女，下嫁灵川尉申檥（1530－1584）。

朝鲜明宗李峘（1534年－1567），中宗嫡次子，李氏朝鲜第十三代君主，初封庆原大君；配偶为仁顺王后青松沈氏（靑川府院君沈连源之孙女）。

仁顺公主（1542年－？），中宗嫡五女，早卒。

孝惠公主李玉荷（1511－1531），中宗嫡长女，生母为章敬王后尹氏；下嫁金安老之子延城尉金禧；中宗二十六年四月，她在产下一女后，因病逝世，得年二十一岁；其夫金禧则卒于同年十月。

朝鲜仁宗李峼（1515－1545），中宗嫡长子，生母为章敬王后尹氏，中宗十年二月二十五日诞生；章敬王后在他出生后不久病逝，因此他一直都由文定王后尹氏扶养；中宗十五年被册封为世子；配偶为孝顺恭懿仁圣王后罗州朴氏。