烟草环斑病毒是一种植物病害,分布于世界各地,其流行程度仅次于烟草普通
花叶病毒病。在中国,
烟草环斑病毒病分布较普遍,但多为局部小面积烟田造成
危害,很少发生流行。
病原形态特征
病毒粒体球形,直径28nm,外有棱角,有60个结构亚单位。TRSV核酸为单链RNA。有2个主要的RNA分子即:RNA-1、RNA-2,分子量分别为2730000、1340000。沉降系数RNA-1为32S;RNA-2为24S。
生物学特性
TRSV以单个或群体的粒体存在于烟草枝条顶端原始细胞核、
细胞质、液泡中;在马铃薯
表皮细胞、大豆叶细胞内。菜豆根尖中、大豆种子细胞壁上、烟草
分生组织细胞内可看到成批的病毒粒体,包在微管中常与胞间连丝有联系,而大豆的维管束鞘、花粉壁内壁、生殖细胞壁和细胞质、珠被、珠心、胚囊壁和大配子体细胞内有聚集的病毒粒体内含体:在普通烟、黄花烟、心叶烟的病斑区细胞,或在第1~2个坏死环内,产生均一的球状、卯形、结晶状、非结晶形内含体,用番红染色鲜艳清晰,这些内含体为病细胞原生质的合成与积聚,逐渐聚结在核的周围,无被膜。
病毒具有好的免疫原性。病毒抗原经静脉、肌肉注射兔子,较容易得到高滴度(1/2048)的特异抗血清。琼脂双扩散实验产生一条沉淀线,不同株系间有血清学关系,产生刺状沉淀线,用此试验可以鉴别TRSV。
病毒的钝化温度:在烟草或法国菜豆汁液中为60~65℃,稀释限点分别为10-3~10-4和10-5~10-6。
体外存活期:室温6~10d,18℃3周;2℃几个月失去侵染性;冻干病汁液封存安培瓶中10年仍具侵染活性;在
无水氯化钙吸干叶组织置10℃下17年,病毒仍有侵染活性。
地理分布
山东、
河南、安徽、辽宁、黑龙江、云南、
贵州、福建、湖南、湖北、陕西、台湾均有分布。
寄主范围
自然寄主:范围很广,包括葫芦科、藜科、苋科、豆科、菊科等
植物,重要的有苘麻(Abutilon theophrasti)、美洲豚草(Ambrosia artemisiifolia)、印地安席R(Apocynum cannabinum)、苋色藜(Chenopodium amaranticolor)、墙生藜(Chenopodium murale)、西瓜(Citrullus lanatus)、罗马甜瓜(Cucumis melo var.cantalupensi)、黄瓜(Cucumis sativus)、西葫芦(Cucurbita pepo)、密生西葫芦(Cucurbita prpo var.melopepo)、瓜尔豆(Cyamopsis tetragonoloba)、曼陀罗(Datura stramonium)、胡萝卜(Daucus carota)、麝香石竹(Dianthus caryophyllus)、大丽花(Dahlia pinnata)、卵叶连翘(Forsythia ovata)、美国白蜡树(Fraxinus americana)、唐菖蒲属一种(Gladiolus hortulanus)、大豆(Glycine max)、千日红(Gomphrena globosa)、堆心菊(Helenium amarum)、向日葵(Helianthus annuus)、洋麻(槿席)(Hibiscus cannabinus)、秋葵(Hibiscus esculentus)、啤酒花(Humulus lupulus)、绣球(Hydrsngea macrophylla)、白薯(番薯)(Ipomoea batatas)、德国鸢尾(Iris germanica)、迎春(Jasminum nudiflorum)、莴苣(Lactuca sativa)、橱香百合(Lilium longiflorum)、多叶羽扁豆(Lupinus polyphyllus)、
番茄(Lycopersicum esculentum)、白香草木犀(Melilotus albus)、黄香草木犀(Melilotus officinalis)、普通烟(Nicotiana tabacum)、撞羽矮牵牛(Petunia violacea)、菜豆(Phaseolus vulgaris)、洋酸浆(Physalis floridana)、豌豆(Jpisum sativum)、蔷薇属某种(Rosa sp.)、银叶茄(Solanum elaeagnifolium)、龙葵(Solanum nigrum)、马铃薯(Solanum tuberosum)、菠菜(Spinacia oleracea)、红三叶草(Trifolium pratense)、白三叶草(Trifolium repens)、郁金香(Tulipa gesneriana)、豇豆(Vigna sinensis)、苍耳(Xanthium sibiric)和百日菊(Zinnia elegans)等重要蔬菜、观赏植物。
传播途径
种子传毒是TRSV扩散的主要途径之一,种传率从
香瓜的3%至大豆的100%不等;胚组织带病毒,种皮不带病毒,花粉可以传毒,至少有16种植物种子可带毒传播TRSV。大豆配子的感染是种传的基本因素,植物感染时的生育期是决定种传程度的最重要因素。
传毒介体是土壤中的
美洲剑线虫(x勿hinema americanum),线虫24h内可以获得病毒,成虫和幼虫均可传毒,随线虫数量增加感染频率也增加;带毒线虫贮存在10℃下49周仍可传毒。带毒线虫食道腔内有病毒粒体,自食道向外缓慢释放。线虫保存在非寄主植物8℃条件下9个月仍可传毒;线虫在非TRSV寄主欧洲草莓(Fragaria vesca)上生活10周后仍能传毒。线虫在16℃、22℃、28℃、34℃均可获毒,除16℃以外其他温度都可传毒,以28℃最适宜。单头介体线虫可以同时传播3个毒株的TRSV;还可以同时传播TRSV和
番茄环斑病毒(ToRSV);10头带毒线虫接种植物3周传毒成功率可达100%。
蓟马(Thrisps tabaci)的若虫可以传毒,但成虫不能传;螨(Tetranychus sp.)、桃蚜(Myzus persicae)、烟草叶甲(Epitrix hirtipemis)、几种叶蝉(Melanoplus differentialis,Melanoplus mexicanus,Melanoplus femurrubrum)等也可以传毒。病毒在昆虫体内不繁殖,也不可以将病毒传给后代。汁液容易传毒,但菟丝子不传毒。
发病条件
病害发生轻重与
施肥关系密切,在高氮水平下病害发生较重,在低氮水平下病害发生较轻。与茬口有关,豆茬、重茬发病重。病害的发生还与烟苗移栽期有关,4月上、中旬移栽比5月上旬移栽发病重。
侵染循环
烟草环斑病毒可在二年生或
多年生杂草寄主以及
烟草和
大豆种子上越冬,其带毒的越冬寄主和带毒种子都可成为初侵染源。病害在烟田可通过汁液摩擦、烟蚜、线虫及烟蓟马等传播,造成再侵染和田间传播。
典型症状
烟草环斑病毒(TRsV)感染大豆最明显症状是病株顶芽卷曲,其他芽变褐色并且脆弱;在茎和复叶叶柄上产生褐色条纹;豆荚发育不良,甚至不生长而死亡;侵染前结的荚上产生暗色斑。大豆花期或花前感染TRSV,病株重量也减轻,种子成熟延缓,产量显著下降。病株种子还有较高比例的紫着色现象。大豆田问病株常晚熟,健株衰老黄化时病株仍为绿色,在健株成熟期可以通过1000m高空航空摄影检测疫情发生区。
烟草种植区TRSV的发生也很普遍。TRSV在烟草上产生环斑,病斑常由断续的坏死线局限起来,呈粉白色或棕色单环或双环,直径约5~8mm,与病斑相邻组织褪绿,有时形成一个晕圈。幼叶和正在成熟的叶上易产生病斑,而老叶上很少产生。TRSV还导致烟草植株矮化,叶片小而质次,使烟草种子量减少27%。病株烟草种子发芽率仅8%~34%,健株种子则为76%~94%。
越桔属植物:TRSV在美国导致越桔的坏死环斑病。病株矮化不结实,嫩枝顶梢枯死、坏死或产生褪绿病斑,叶片上产生环或线。
西瓜:TRSV可自然侵染西瓜,导致植株矮化、褪绿,结的瓜多疣,叶上产生坏死斑、节问短缩、束顶。TRSV侵染西瓜所结的瓜呈丘疹状,病斑开始形成于中果皮,为小的坏死区,由过度生长的
薄壁细胞分开,在生长晚期凉爽气候条件下有更多的坏死并有畸形发展。
山东、河南、
安徽、辽宁、黑龙江、云南、贵州、福建、
湖南、湖北、陕西、台湾均有分布,整个生育期均可发生,以大田发生较多。染病叶上产生轮纹状或波浪状的坏死斑纹,大多褪绿变黄,维管束受害后影响水分、养分输送,造成叶片干枯,品质下降。茎或叶柄上可见褐色条斑或凹陷溃烂。
检测方法
由于
寄主范围广、症状变化大,田间观察受到相当程度的限制,特征性症状只对特殊的病毒一寄主组合有作用。如烟草上的褪绿环斑症状。
实验室检测常用血清学方法,由于病毒的免疫原性好,早期的环状沉淀、微量沉淀、试管沉淀和凝胶扩散试验都曾有效地应用于TRSV检测,地ELISA技术灵敏度更高,是对TRSV进行血清学检测的更好的方法。
电镜观察中的直沾法可以用于观察病毒粒体形态大小,但由于粒体直径较小,识别比较困难,如果用抗血清诱捕或诱捕修筛法制片,观察效果较佳。
分子检测可用
cDNA探针和PCR,尤其RT-PCR技术显示了更好的应用前景。
检疫措施
对来自日本、印度、印度尼西亚、美国、加拿大、古巴、多米尼加、巴西、澳大利亚、新西兰、巴布亚、摩洛哥、扎伊尔、马拉维、比利时、
荷兰、
法国、英国、爱尔兰、欧洲等国家和地区的种子苗木应依法实施严格检疫。
(1)出口国家和地区应出具检疫证书,声明产自未发病区或无该病毒。
(2)在核定的防虫温室隔离检疫1年。
防治方法
对于国内疫情发生区要封锁控制,并做好防治工作:
(1)控制传毒介体:防治传毒介体线虫可以减少病毒对寄主根部侵染。
(2)基因调控在遗传育种上应用,获得抗病性,可以有效地防治TRSV。
(3)施用抑制物质:氰化物抑制TRSV蛋白的合成,氰化钠、氰化钾不仅阻碍坏死症状形成,而且阻碍病毒的繁殖;叠氮钠可以抑制病斑的形成。还有2,4-D、脱脂奶粉、清洁剂和离子、激素、
黄曲霉素、桔霉素、酵母、放线菌D、菠菜汁液等都有一定的防病效果。
(4)研究应用卫星RNA构建抗病基因,控制病害的发生。