瑞氏染色是最常用而又最简单的染色方法。瑞氏试剂中之酸性伊红和碱性美蓝混合经化学作用后，变成中性之 伊红化美蓝，久置后，经氧化而含有天青。此三种染料分别和细胞核及浆中的NH3+和COO-等结合，使细胞核及胞浆着色。由于系中性染料，又有缓冲液调节酸碱度，所以细胞受染后，蓝红等颜色都较适中，核染质、胞浆及其中之颗粒显色较为清楚。

瑞氏染料是由碱性染料美蓝（ Methvlem blue ）和酸性染料黄色伊红（ Eostm Y ）合称伊红美蓝 染料即瑞氏 （美蓝－伊红Y）染料。伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。

用甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：

（ 1 ）甲醇使瑞氏染料中美蓝（ M ）与伊红（ E ）在溶液中离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。 在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余 美蓝就可以 使胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。

（ 2 ）甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构的表面积，提高细胞对染料吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速染色反应。

瑞氏染液配制：

瑞氏染料 830mg 或 1g

甲醇（ AR ） 500ml 或 600ml

先称干燥瑞氏染料（事先放入温箱干燥过夜）放置乳钵内， 用乳棒轻轻敲染料成粉末状，再研磨至细粉末状（听不到研芝麻声）。加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽而无染料粉粒沉着后，再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮。静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，直至乳钵内染料及甲醇用完为止。染料完全转移至储存瓶后，摇匀，密封瓶口，室温下避光保存，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存 3 个月以上为佳。

1、缓冲液作用：染色对氢离子浓度是十分敏感的，据观察 pH 值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解。 缓冲液须保持 一定的 pH 使染色稳定， PBS 的 pH 一般在 6.4~6.8 ，偏碱性染料可与缓冲液中酸基中和，偏酸性染料则与缓冲液中的碱基中和，使 pH 稳定。

2、缓冲液配制（ pH6.4~6.8 ，弱酸性）：

配方 1 ： 配方 2 ：

1% KH 2 PO 4 30ml M/15 KH 2 PO 4 73.5 ml

1% Na 2 HPO 4 20ml M/15 Na 2 HPO 4 26.5ml

H 2 O( 新鲜 ) 加至 1000ml

置室温黑暗处，瓶口密封，防止霉菌污染，如有污染则应报废。