伊红美蓝
用于细胞染色的染料
一种用于细胞染色的染料,又称瑞氏染料,是碱性染料美蓝(Methylene blue)和酸性染料黄色伊红(Eosin Y)的合称。伊红美蓝染料染色称为瑞氏(Wright's stain;美蓝-伊红Y)染色。
简介
一种用于细胞染色的染料,又称瑞氏染料,是碱性染料美蓝(Methvlem blue)和酸性染料黄色伊红(Eostm Y)的合称。伊红美蓝染料染色称为瑞氏(Wright's staim;美蓝-伊红Y)染色。
用甲醇作瑞氏染料溶剂,即成瑞氏染液,或称伊红美蓝染液。
成分分析
伊红钠盐的有色部分为阴离子,无色部分为阳离子,其有色部分为酸性,故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的,美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐,其有色部分为阳离子,无色部分为阴离子,恰与伊红钠盐相反。
甲醇是瑞氏染料良好溶剂,有两种作用:
1. 甲醇使瑞氏染料中美蓝(M)与伊红(E)在溶液中离解,可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲 醇
ME(瑞氏染料)----→M+ + E-
在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青,美蓝天青与伊红化合物能使核染成紫红色,但不能使胞浆染为蓝色,多余美蓝就可以使胞浆染成蓝色,染色主要是化学作用,是离子彼此结合的反应。
2. 甲醇具有强大的脱水力,可将细胞固定在一定形态及增加细胞结构表面积,提高细胞对染料吸收作用,同时由于甲醇吸附染色液中的水,使染色液升温,加速染色反应
配制
瑞氏染料
瑞氏染料 830mg或1g
甲醇(AR) 500ml或600ml
○先称干燥(事先放入温箱干燥过夜)瑞氏染料放置乳钵内,用乳棒轻轻敲碎染料成粉末,再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末,加少许甘油甲醇溶解研磨,使染料在乳缸内显“一面镜”光泽,而无染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮,静置片刻,将上层液体倒入一清洁储存瓶内(最好用甲醇空瓶),再加甲醇研磨,重复数次,至乳钵内染料及甲醇用完为止,摇匀,密封瓶口。
○存室温暗处,储存愈久,则染料溶解、分解就越好,一般储存3个月以上为佳。
缓冲液
缓冲液作用:
○染色对氢离子浓度是十分敏感的,据观察pH值的改变,可使蛋白质与染料形成的化合物重新离解
○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定,PBSpH 一般在***~6.8,
○偏碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用,偏酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用,使pH恒定。
●缓冲液配制(pH6.4~6.8,弱酸性):
配方1 :1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
配方2 :1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鲜) 加至1000ml
置室温黑暗处,瓶口密封,防止霉菌污染,如有污染则应报废。
培养基
简介
伊红美蓝培养基(eosin-methylene blue medium,简称EMB medium),一般用于检测大肠杆菌
原理
伊红酸性染料,美蓝为碱性染料。当大肠杆菌分解乳糖产酸时细菌带正电荷被染成红色,再与美蓝结合形成紫黑色菌落,并带有绿色金属光泽。而产气杆菌则形成呈棕色的大菌落。
碱性环境中不分解乳糖产酸的细菌不着色,伊红和美蓝不能结合,故沙门氏菌等为无色或琥珀色半透明菌落。金葡菌在此培养基上不生长。
常用的伊红美蓝乳糖培养基,可用来鉴别饮用水和乳制品中是否存在大肠杆菌等细菌。如果有大肠杆菌,因其强烈分解乳糖而产生大量的混合酸,菌体带H+,故菌落被染成深紫色,从菌落表面的反射光中还可以看到金属光泽
鉴定步骤
伊红美蓝培养基鉴定水中大肠杆菌
步骤如下:
①制作伊红美蓝培养基,趁热注入培养皿中,凝成平板,待用。
②用灭过菌的锥形瓶盛取河水或沟水,按1:10稀释。
③取0.1毫升稀释液接种于伊红美蓝培养基上。用平板划线分离法进行分离。
④将划线后的培养皿倒置37℃温箱中培养18~24小时。培养基中会出现大肠杆菌菌落,菌落中心呈暗蓝黑色,发金属光泽
⑤将菌落接种于斜面培养基上(由营养琼脂培养基制成)。
配置方法
配方:
乳糖 10g
琼脂 20~30g
蒸馏水 1000ml
2%伊红水溶液 20ml
0.5 %美蓝水溶液 13ml
储备培养基的制备:
先将琼脂加至900ml蒸馏水,加热溶解,然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨,混匀使之溶解,再以蒸馏水补足至1000ml,调整PH为7.2~7.4。趁热用脱脂棉绒布过滤,再加入乳糖,混匀后定量分装于烧瓶内,置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min,贮存于冷暗处备用。
制法:
蛋白胨磷酸盐琼脂溶解于蒸馏水中,校正PH,分装于烧瓶内,121℃高压灭菌15min备用。临用时加入乳糖并加热溶化琼脂,冷至50~55℃,加入伊红和美蓝溶液,摇匀,倾注平板。
参考资料
最新修订时间:2023-06-29 23:41
目录
概述
简介
成分分析
参考资料