瑞氏染液由
酸性染料伊红和
碱性染料美蓝组成的复合染料，溶于甲醇 ，后解离为带
正电的美蓝和带负电的伊红离子。
使用方法
瑞氏（Wright's stain；
美蓝－
伊红Y）染色：
1．
瑞氏染料是由
碱性染料美蓝（Methvlem blue）和
酸性染料黄色伊红（Eostm Y）合称伊红美蓝染料即瑞氏（美蓝－伊红Y）染料。
2．用
甲醇作瑞氏染料溶剂，即成瑞氏染液。甲醇是瑞氏染料良好溶剂，有两种作用：
（1）甲醇使瑞氏染料中美蓝（M）与伊红（E）在溶液中
离解，可使细胞成分选择性吸附其中的有色物质而着色。
甲 醇
ME（瑞氏染料）----→M+ + E-
在配制的瑞氏染液中美蓝如放置过久即可氧化而含有天青，
美蓝天青与
伊红化合物能使核染成紫红色，但不能使胞浆染为蓝色，多余美蓝就可以使
胞浆染成蓝色，染色主要是化学作用，是离子彼此结合的反应。
（2）
甲醇具有强大的脱水力，可将细胞固定在一定形态及增加
细胞结构的表面积，提高细胞对染料
吸收作用，同时由于甲醇吸附染色液中的水，使染色液升温，加速
染色反应。
染液配制
(1) 瑞氏染液配制：
○先称干燥（事先放入温箱干燥过夜）
瑞氏染料放置乳钵内，用乳棒轻轻敲碎染料成粉末，再行研磨至听不到研芝麻声即呈细粉末，加少许甘油或甲醇溶解研磨，使染料在乳缸内显“一面镜”光泽，而无染料粉粒沉着。
○再加较多量甲醇研磨呈一面镜光亮，静置片刻，将上层液体倒入一清洁储存瓶内（最好用甲醇空瓶），再加甲醇研磨，重复数次，至乳钵内染料及甲醇用完为止，摇匀，密封瓶口。
○存室温暗处，储存愈久，则染料溶解、分解就越好，一般储存3个月以上为佳。
●缓冲液作用：
○染色对
氢离子浓度是十分敏感的，据观察pH值的改变，可使蛋白质与染料形成的化合物重新
离解。
○缓冲液须保持一定的pH使染色稳定，PBS的pH 一般在6.4~6.8，
○偏
碱性染料可与缓冲液中酸基起中和作用，偏
酸性染料则与缓冲液中的碱基起中和作用，使pH恒定。
缓冲液配制
（pH6.4~6.8，弱酸性）：
配方1 ： 配方2：
1% KH2PO4 30ml M/15 KH2PO4 73.5 ml
1% Na2HPO4 20ml M/15 Na2HPO4 26.5ml
H2O(新鲜) 加至1000ml
置室温黑暗处，瓶口密封，防止
霉菌污染，如有污染则应报废。
姬姆萨（Giemsa's stain；天青-
伊红）染色
1．姬姆萨染料是伊红(AzurII Eqsin)和天青（蓝）2号合成的。
2．姬姆萨染料（ Giemsa, 天青-伊红）染液配制：
姬姆萨染料（粉末） 0.5g或7.5g
甲醇（AR） 33ml 或500ml
●先将姬姆萨染料放入乳钵中，逐渐倒甘油研磨溶于甘油中，置于56℃水温箱内，90～120分钟，然后加入
甲醇，摇匀后放置数天，过滤后或不过滤即可使用。此染液放置室温阴暗处，时间越长越好。
●使用染液可临时配置：姬姆萨染液1ml，加DDH2O10ml混匀。即可使用。
染色步骤
（2）将血或骨髓涂片放置姬姆萨使用液15～30分钟。
（3）涂片用自来水冲洗，在室温中干燥待查。
染液鉴定
瑞氏或
姬姆萨染色液鉴定：刚配好或放置一个月以上的染液可进行下列鉴定：
1．取1滴染液于乳白玻板上，自行迅速扩散开，其颜色变紫红色，且有
伪足形成。
2．取1滴染液加1滴缓冲液，染液由深蓝色立即变为紫红色。
3．取血片或骨髓片进行试染检查，观察染色后各类细胞的胞核、
胞浆及颗粒着色情况，pH是否合适及染色合适时间。如有上述变化，表明染液合格，可供使用。
混合染色
瑞氏染色(Wright's)-姬姆萨（Giemsa's）混合染色：
●瑞氏染色的染料配方浓度对细胞核着色程度适中,细胞核结构和色泽清晰艳丽,对核结构的识别较佳,但对
胞浆着色
偏酸,色泽偏红,对细胞浆内颗粒特别是
嗜天青颗粒及嗜中性颗粒着色较差。
●
姬姆萨染色对胞浆着色能较好的显示胞浆的
嗜碱性程度,特别对嗜天青、
嗜酸性、嗜碱性颗粒着色较清晰, 色泽纯正,而对胞核着色偏深,核结构显示较差。
●故采用以瑞氏染液为主，姬姆萨染液为辅的混合染色。
染色步骤:
1. 先用瑞氏染液将涂膜面充分覆盖；
2. 稍等片刻再加姬姆萨染液2-3滴加减(根据涂片上细胞多少及增升程度酌情而定)；
3. 稍等1-2分钟后,再加
磷酸盐缓冲液,加时应缓慢地一滴一滴加在涂片膜上,直至膜面上染色液形成
表面张力而终止染色液加入；
4. 染色30-40分钟；
5. 分色：用自来水缓缓冲洗至少3分钟以上,待干，勿用
滤纸吸干,以免滤纸纤维污染涂片。