PDA培养基是人们对马铃薯
葡萄糖琼脂培养基的简称,即Potato Dextrose Agar (Medium),依次对应马铃薯、
葡萄糖、琼脂的英文。
其做法是先洗净去皮,再称取200g马铃薯切成小块,加水煮烂(煮沸20~30分钟,能被
玻璃棒戳破即可),用八层纱布过滤,加热,再据实际实验需要加15-20g琼脂,继续加热搅拌混匀,待琼脂溶解完后,加入葡萄糖,搅拌均匀,稍冷却后再补足水分至1000毫升,分装试管或者
锥形瓶,加塞、包扎,(115℃)灭菌20分钟左右后取出试管摆斜面或者摇匀,冷却后贮存备用。
2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用
pH试纸测定其pH。如果培养基
偏酸或偏碱时,可用l
mol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入NaOH或HCl溶液,防止局部过酸或过碱破坏培养基成分。
4.培养基也可以加入
氯霉素或
土霉素,加入量为0.2g/L培养基,主要是为了抑制细菌的生长,减少干扰性
按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在
加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在
量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。
把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在
石棉网上,小火加热,并用
玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。
分装量:
固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;
半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。
培养基分装完毕后,在试管口或
三角烧瓶口上塞上棉塞(或
泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。
加塞后,将全部试管用麻绳或
橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层
牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用
记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。
棉塞的作用:一是防止
杂菌污染;二是可过滤空气,保证通气良好,并可减缓
培养基水分的蒸发,所以正确地制备棉塞是培养基制备中重要的一环。
正确的棉塞是形状、大小,松紧应与试管口(或
三角烧瓶)完全适合。过紧则妨碍空气流通,操作不便;过松时,空气会毫无障碍地进入试管(或三角烧瓶)中,达不到灭菌的目的。棉塞过小往往易掉进试管内,因此棉塞质量的优劣对实训的结果有很大的影响。正确的棉塞头较大,加塞时,应使棉塞长度的1/3留在试管口外,2/3在试管口内。有条件的实训室已使用坚固的塑料试管帽、金属试管帽、
硅胶泡沫塞替代棉塞,制作棉塞要选纤维较长的棉花,一般不选用
脱脂棉。因为它容易吸水变湿,造成污染,而且价格也贵