蕨藻,蕨藻科蕨藻属植物。藻体长可达几米,由假根、匍匐茎和直立枝部分组成。匍匐茎下面生须状假根固着于基质上。上面生长直立枝,直立枝的形状因种类不同而变异。藻体内充满纵横交错的藻丝。细胞质内有叶绿体和白色体。
蕨藻科蕨藻属植物。蕨藻藻体长可达3米,是单细胞生物。由
假根、
匍匐茎和直立枝 3部分组成,匍匐茎下面生须状假根固着于基质上;上面生长直立枝,直立枝的形状因种类不同而变异。藻体内充满横纵交错的藻丝。细胞质内有叶绿体和白色体。以藻体断裂分离进行营养性繁殖;为异配,异宗配合或同宗配合。60余种,
蕨藻是世界性的热带藻类,主要分布在热带海中,中国约有12种,产于南海,盛产于南海南部沿岸。在中国台湾、海南和广东也有广泛分布。蕨藻生长在大干潮线下的岩石、珊瑚礁上或中、低潮带的沙地上。
在
单因素实验基础上,采用正交实验,确定了总状蕨藻多糖的提取工艺与工艺参数。总状蕨藻多糖提取工艺为:热水与
蛋白酶酶解相结合提取。工艺参数为固液比1∶10,蛋白酶用量136.5U/g,60℃酶法提取2.5h后,再将固液比调至1∶20,在温度95℃条件下继续进行热水提取2.5h,多糖得率为6.7﹪,比单纯热水提取时的多糖得率提高了131.0﹪,还大大简化了后续繁琐的除蛋白工艺。
热水与蛋白酶酶解相结合浸提得到的总状蕨藻多糖提取液经Sevage法和透析法等步骤初步纯化后得到的总状蕨藻硫酸多糖(CaulerpaRacemosaSulfatedPolysaccharide,简称为CRSP1);以DEAE-52
纤维素为固定相和不同浓度的NaCl为流动相对CRSP1进行分段洗脱,分别得到0.5M和1.0MNaCl洗脱的两个主要级分CRSP1A和CRSP1B。
采用
苯酚-硫酸法、硫酸-咔唑法、Folin-酚法和BaCl2-明胶法分别对CRSP1、CRSP1A和CRSP1B的中性糖含量、
糖醛酸含量、
蛋白质含量和硫酸基含量进行了测定;采用
气相色谱法分析了CRSP1、CRSP1A和CRSP1B的单糖组分;采用氨基酸自动分析仪分析了CRSP1、CRSP1A和CRSP1B的氨基酸组成;采用Sepharose4B凝胶柱测定了CRSP1A和CRSP1B的分子量分布。化学组成测定结果显示,CRSP1、CRSP1A和CRSP1B的中性糖含量分别为53.7﹪、36.0﹪和45.1﹪,糖醛酸含量分别为7.9﹪、3.9﹪和7.6﹪,蛋白质含量分别为9.9﹪、14.0﹪和2.0﹪,硫酸基含量分别为27.6﹪、45.6﹪和48.3﹪;
气相色谱分析结果显示,CRSP1由11.4﹪
甘露糖、56.8﹪
葡萄糖和31.8﹪半乳糖组成,CRSP1A由10.9﹪甘露糖和89.1﹪葡萄糖组成,CRSP1B由0.8﹪葡萄糖和99.2﹪半乳糖组成;氨基酸分析结果显示,CRSP1、CRSP1A和CRSP1B中的氨基酸组成相似,
天门冬氨酸和谷氨酸含量异常高,其次是丙氨酸、甘氨酸和缬氨酸,色氨酸和组氨酸含量最低;分子量测定结果表明,CRSP1A和CRSP1B是至少含有两个组分的混合物,CRSP1A由分子量为136.5×104和14.4×104的两部分组成,CRSP1B由分子量为14.4×104和9.9×104的两部分组成。
采用MTT法检测了未去游离蛋白总状蕨藻多糖CRSP、去游离蛋白多糖CRSP1以及CRSP1A和CRSP1B对K562
细胞增殖的抑制作用,体内实验采用灌胃给药观察了CRSP和CRSP1对小鼠H22实体瘤的抑制作用。结果发现,CRSP和CRSP1在体内外均具有抑制
肿瘤细胞生长的作用,并且在相同剂量条件下,CRSP1的抗肿瘤活性明显强于CRSP的抗肿瘤活性;CRSP1、CRSP1A和CRSP1B在体外对K562细胞生长都具有显著抑制作用,同剂量下CRSP1的抑制率最高,其次是CRSP1A,CRSP1B的抑制率最低,其中CRSP1和CRSP1A在中剂量的抑制率达到最高值,而CRSP1B的抑制率随着剂量的增加呈递减趋势。 5.采用腹腔注射与灌胃两种方式给药,观察了CRSP1对小鼠S180肉瘤的抑制作用以及对小鼠免疫器官和碳廓清指数的影响,结果显示,CRSP1采用腹腔注射与灌胃两种方式给药,对小鼠S180肉瘤均具有显著的抑制作用,且腹腔注射能显著地增加小鼠的脾脏指数,灌胃给药能显著升高小鼠碳廓清指数。这些事实表明,增强机体的免疫功能可能是总状蕨藻多糖抗肿瘤作用的机制之一。 6.采用体外免疫试验方法检测了CRSP1、CRSP1A和CRSP1B直接或协同
有丝分裂原ConA对正常小鼠脾淋巴细胞的增殖作用以及其对小鼠腹腔
巨噬细胞吞噬中性红和分泌
一氧化氮的影响。结果显示,三者在一定剂量范围内,直接或协同有丝分裂原ConA对小鼠脾
淋巴细胞增殖均有一定的促进作用,还能够有效地促进小鼠腹腔巨噬细胞MΦ吞噬中性红和分泌NO的数量,说明CRSP1、CRSP1A和CRSP1B能增强机体的免疫功能,进而发挥抗肿瘤作用。