画像的主人公是葡萄牙的
伊莎贝拉皇后(1503-1539)，神圣罗马帝国皇帝兼西班牙国王
查理五世深爱的妻子，西班牙国王
腓力二世的母亲，葡萄牙国王
曼努埃尔一世的女儿。提香在她死后画了她，采用一种较为普通的绘画作为参照。这幅肖像画遵循了拉斐尔和达芬奇使用的一个经典构图方案，其中模特坐在窗外有风景的的窗口旁边。风景的组合具有纵深感，绿色和蓝色组成的冷色掉与室内场景的暖色调形成强烈对比。图中伊莎贝拉显得有些僵硬，可能为了展示一种威严的状态，以便来暗示西班牙帝国的威严。
她穿着一件富丽堂皇的红色连衣裙和金色的锦缎，饰有莱茵石。它还装饰着华而不实的珠宝：一条珍珠项链，胸前有一个扣子，上面挂着另一颗珠珠上的宝石，右手上挂着一枚戒指，还有一顶宝石顶的头饰。她那僵硬的发型，当时很时髦，是用辫子做的。皇后左手拿着一本打开的书，也许是一本弥撒书或祈祷书，用专注的表情望着远处的一个点。
伊莎贝拉（1503-1539年）是葡萄牙国王
曼努埃尔一世和第二任王后阿拉贡的
玛丽亚所生的长女。她的名字是以她外祖母卡斯蒂利亚女王
伊莎贝拉一世的名字命名的。通过她的父亲，她是王子维塞乌公爵费迪南的孙女。伊莎贝拉公主曾经是葡萄牙王位的继承人选，直到她的弟弟路易于1505年出生为止。因为她是葡萄牙国王的长女，所以追求她的男子不少。在以前的欧洲王室里，长女比较次女有不少的优势。查理皇帝也想找个女子替他管理他的西班牙、卡斯蒂利亚、阿拉贡等王国，因为他不常在那里。
1521年，伊莎贝拉公主的父亲去世，由她的哥哥继续王位，就是国王
若昂三世。当时，一致同意，新国王若昂三世与查理的妹妹奥地利的
凯瑟琳结婚；伊莎贝拉与查理结婚。查理也很喜欢伊莎贝拉，他同意与她结婚。他们于1526年3月10日在塞尔维亚阿尔卡萨尔城堡举行。查理和伊莎贝拉的婚姻很幸福，他们彼此爱着对方。据说，在蜜月期间，尽管很多人围观，但是这对新婚夫妇在一起，“他们并没注意到任何人，边说边笑，没有什么能分散他们的注意力。”
伊莎贝拉是一位很有才能且很称职的皇后。查理不在期间，1529-1532年和1535-1539年伊莎贝拉担任西班牙摄政。她的美丽和智慧为人所称道。1539年5月，伊莎贝拉因为第六次怀孕流产了一个孩子而死，时年35岁。当时，查理不在身边，有事在外，听说后深感悲恸。受委托画像的提香准确把握出了伊莎贝拉这位王后的神韵和风姿。她表情微笑且显得端庄美丽，凝视着前方。衣服是当时文艺复兴时期较流行的样式，前胸微露，佩戴着胸饰。袖子很宽大，有各种花纹，显得优雅且时尚。该画原来是是西班牙王室收藏的，后来进入了马德里普拉多博物馆。