菌种鉴定一般就只要提取基因组
DNA,然后
PCR扩增16s rDNA片段,上机测序之后,上GeneBank或者Eztaxon对比即可。一般序列相似度在99%以上就可以认为是同一个种
细菌(当然也有例外,
DNA序列仅仅是一个参考指标)。
菌种鉴定一般就只要提取基因组
DNA,然后
PCR扩增16s rDNA片段,上GeneBank或者Eztaxon对比即可。一般序列相似度在99%以上就可以认为是同一个种
细菌(当然也有例外,
DNA序列仅仅是一个参考指标)。
常规鉴定内容有形态特征和理化特性。形态特征包括显微形态和培养特征;理化特性包括营养类型、碳
氮源利用能力、各种代谢反应、
酶反应和
血清学反应等。
BIOLOG鉴定系统以微生物对不同
碳源的利用情况为基础,检测微生物的特征
指纹图谱,建立与微生物种类相对应的数据库。通过软件将待测微生物与数据库参比,得出鉴定结果。该系统已获美国FDA认可,已逐步应用于食品和饮品企业、环保、海洋生物/水产品、制药、
农业微生物、生物治理、化妆品、临床等领域的微生物鉴定试验中。
应用分子生物学方法从遗传进化角度阐明微生物种群之间的
分类学关系,是
微生物分类学研究普遍采用的鉴定方法。
分子生物学实验室,配有
PCR仪、
高速冷冻离心机、
电泳仪、HPLC、
凝胶成像系统、紫外控温分析系统等先进仪器设备,以及
DNAMAN、
BIOEDIT、
CLUSTALX、TREEVIEW等序列分析软件。采用核酸序列分析法分析细菌16S rDNA/16S-23S rDNA区间序列、酵母18S rDNA/26S rDNA(D1/D2)序列及
丝状真菌的18S rDNA/ ITS1-5.8S-ITS2序列,提供科学的鉴定结果。
API鉴定系统涵盖15个鉴定系列,约有1000种生化反应,已可鉴定超过600种的细菌。鉴定过程中,可根据细菌所属类群选择适当的生理生化鉴定系列,通过软件将待测细菌与数据库参比,得出鉴定结果。 CICC可应用API 50CH系列、API 20 E系列、API Staph系列对
乳酸杆菌(Lactobacillus sp.)和相关细菌、
芽孢杆菌(Bacillus sp.)、
葡萄球菌属(Staphylococcus sp.)、
微球菌属(Micrococcus sp.)和库克菌属(Locuria sp.)进行鉴定。
功能性分析及功能
基因CICC不断致力于工业微生物资源的功能及其功能基因研究,通过
木聚糖酶、
纤维素酶、
葡萄糖异构酶、
β-甘露聚糖酶等功能基因的克隆进行菌种产酶的功能性分析。应用gyrA、atpD及pheS等
看家基因于微生物菌种鉴定,在某些种、亚种、株间有较好的分辨效果。
RAPD、
SSCP技术 随着微生物菌种应用的进一步发展,在食品安全管理、生物产品出口认证、知识产权保护等行业需求日益增加,微生物菌种株水平的鉴别技术成为一个迫切需要解决的问题。 CICC采用
随机扩增多态性DNA(Randomly amplified polymorphism DNA,RAPD)技术和
单链构象多态性(Single Strand Conformation Polymorphism,SSCP)技术对微生物
菌株进行鉴别。如采用RAPD技术能够对同一菌种原始菌株与诱变菌株进行鉴别,对诱变菌株知识产权保护具有重要意义;采用SSCP技术进行工业酒精酵母菌株的鉴别,此技术结合菌株发酵特性,在酒类生产的质量控制方面起到积极作用。
TLC
薄层层析CICC将TLC薄层层析技术应用于微生物菌种鉴定,进行细菌、
放线菌细胞壁化学组分分析(氨基酸、糖),作为划分属特征的重要鉴定技术手段,起到了良好的辅助作用。
全细胞脂肪酸分析鉴定系统 采用Sherlock全自动
细菌鉴定系统,通过对不同
菌株的脂肪酸图谱进行分析,并与标准数据库进行比对,来鉴定细菌及酵母。该技术是细菌或酵母种水平鉴定的有效手段之一。(9)(G+C)mol%及DNA/
DNA杂交 CICC通过采用DU800核酸蛋白分析仪测定
Tm值,从而得到微生物菌株的(G+C)mol%,并与模式菌株进行DNA/
DNA同源性分析,该鉴定技术手段是多相鉴定的重要组成部分。