苏木素是一种有机物,化学式为C16H14O6,为褐色结晶粉末,用作核和染色质的染色剂。用于光度法测定钒、铝、锡(IV)、氟、铌、钽等。
简介
苏木素和
伊红在
组织学上被经常使用,与
碘液不同,这是一种永久
染色剂。其他常用的含有苏木素的染色剂有
磷钨酸苏木素染色剂,也就是磷钨酸与苏木素的混合物。苏木素染色剂经常为组织的研究使用。 明矾和三价铁盐常常被用作
媒染剂,展示核和细胞质结构。这些媒染剂的原理都是形成媒染剂-染料-组织复合体,从而显示颜色。使用的盐不同颜色也不同: 当用
铁盐呈现
深蓝色颜色沉淀,用
铝盐通常显示蓝白色。下面分别介绍铝苏木素溶液和
铁苏木素溶液。
历史
在20世纪70年代,由于巴西
热带雨林被大量砍伐,
洋苏木大量减少,苏木素的产量随即大量减少。苏木素的价格上升惊人,因而大大提高了组织病理学诊断的成本,引起了寻找苏木素替代品的高潮。不过,在各种苏木素的替代品的地位真正确立之前,苏木素又重返市场,又在组织病理学诊断中发挥其重要作用。到2013年为止,几种推荐使用的替代染剂有
铬天青、焙花青、
茜素紫(又名焦没食子
酚酞、棓因)。这些染料都用三价
铁离子作为
媒染剂。焙花青还可以用
铬矾作媒染剂。
铝溶液
常用的两种铝苏木素溶液有Ehrlich氏溶液和Harris氏溶液。铝苏木素溶液能够把细胞核染成半透明的浅蓝色,在酸性环境下会迅速变成红色。作为
媒染剂使用的钾铝硫酸盐在碱性溶液通常结合与
氢氧根形成不能溶解的
氢氧化铝。 在过量的酸中,氢氧化铝由于缺乏OH-离子而溶解,因此,铝苏木素溶液的酸性溶液变成红色。 在铝苏木素溶液染色时,被染色的部分通常转移到一种碱性溶液中,中和酸并释放氢氧根,形成一个不溶的蓝色铝
苏木精复合物。
由于自来水碱性不十分强,通常用每升含有33.5 g NaHCO4和20克的
MgSO4,并加入
百里香酚兰的溶液代替。使用冷水会减慢染色过程。 实际上,使用在10°C之下的冷水甚至可能导致组织呈现红色。
Ehrlich
1 g 苏木素
60 g 明矾(铝钾硫酸盐)
首先,在100 ml无水乙醇中溶解1 g 苏木素,微热。 然后,在100 ml蒸馏水中溶解60 g明矾加入100 ml甘油微热。 第三步,混合二种溶液并且增加10 ml冰醋酸。 然后转移到用棉花轻轻塞住口的
烧瓶中,暴露在空气和阳光中几个星期,每天震荡溶液。在这个过程中,苏木素被部分氧化。 最后,把溶液转移到一个封口很严的
试剂瓶中在温暖处存放。
染色时,有时需要加入0.3 g
碘酸钠。 因为苏木素溶液被氧化,溶液的颜色从紫色将变成深红,而醋酸刺激性气味将变成宜人的芳香。 甘油作为稳定剂并且减速溶液的蒸发。 然而,甘油可以减速染料的成熟,所以可以在最初的制备以后的4到6个星期后加入。
Ehrlich的苏木素溶液染色时,
黏多糖物质例如
软骨素也被染成蓝色。 染色时间通常是15到40分钟。
Harris
1 g 苏木素
20 g 明矾(铝钾硫酸盐)
首先,在10 ml无水乙醇中溶解1 g 苏木素,微热。 然后,在500 ml烧杯中加入190ml蒸馏水和20 g明矾。 第三步,加入氧化汞,立即插入冷水中迅速降温。要用开口较大的容器,防止加入氧化汞后放出
氧气引起爆炸。加入氧化汞后,溶液应该呈现深紫色。加入4%的l冰醋酸能够使对细胞核染色的特异性更强。 最后,把溶液过滤,转移到一个密封的试剂瓶中,立即使用或长期保存。
Harris氏苏木素配方染色被用于细胞核的常规检查和
性染色体的检查。染色时间通常是5到20分钟
Cole
1.5 g 苏木素
50 ml1%的碘的95%乙醇溶液
700ml饱和的明矾溶液
把苏木素溶解到250ml温的蒸馏水中,加入
碘酒,加入明矾溶液,煮沸。
Cole氏
苏木素染色溶液使用前要冷却,过滤。染色时间通常是10分钟。
Mayer
比Ehrlich氏苏木素配方灵敏度好,不会或很少会把
黏多糖物质染色。
1 g 苏木素
0.2g NaIO3
50g 明矾
1g柠檬酸
50g水合三氯乙醛
把苏木素,明矾,
碘酸钠加入1000ml蒸馏水溶解,过夜放置,以便苏木素充分溶解。加入柠檬酸,
水合氯醛,煮沸5分钟后冷却。
铁溶液
常用的两种
铁苏木素溶液有Weigert氏溶液(使用
氯化铁铵作为
媒染剂)和Heidenhain氏溶液(使用
硫酸铁铵作为媒染剂)。它们都是活泼的氧化剂,不能长期保存。铁
苏木精溶液能够用于几乎所有的
固定剂,而且如果用于
媒染的过量的
铁离子都被冲洗净的话,能够永久着色。在
酒精中浸泡多年的组织往往不易着色,这时就可以选择
铁苏木素染色,效果很好。铁苏木素溶液会把细胞核染成灰黑色,常常用于显微照相。
Weigert
Weigert氏苏木素配方是实验室使用的标准
铁苏木素溶液,特别是在染色显示
肌纤维时。当使用的
生物材料或已经用过的试剂中含有酸时,最适合使用的就是Weigert氏苏木素溶液,因为这时所有的铝苏木素溶液染细胞核时都会褪色。
A液
1g苏木素
B液
在
酒精中溶解苏木素,微热。在另一个容器中混合盐酸、氯化铁和蒸馏水。两种溶液都很稳定,可以放置6个星期不变质。染色前,把两溶液等量混合,得到深黑色混合液,即可染色。混合液可以保存1~2天。
Heidenhain
Heidenhain氏苏木素配方用于细胞学染色观察,特别是用于一些较薄的组织的回染。它可以用于细胞核的染色观察,能够清楚地显示染色体、
染色质以及细胞质中
线粒体的位置。此外,还可以使
髓鞘染色。
0.5 g 苏木素
10 ml 95%乙醇
100 ml蒸馏水
把染色剂和媒染剂分开配制,放置4~5星期成熟。染色时再混合。
磷钨酸
1g苏木素
用多份水分别溶解
溶质,然后再混合起来。光照下放几个星期成熟。加入0.177g钾可以立即成熟。
配好后,
染色剂的颜色为红棕色到紫色。染色时,细胞核,肌动纤维为蓝色,骨骼、软骨为
橘红色、红棕色直到深砖红色。由于染色是逐步进行的,所以最好每小时显微镜观察一次。酒精可以洗去红色,因此,冲洗时间要短。染色时间是12~24小时。