聚合酶链反应技术诊断
幽门螺旋杆菌是否存在仅需微量的DNA,而不需要活菌存在(这不同于其他幽门螺旋杆菌检测方法),它不仅可以检测胃内幽门螺旋杆菌,还可望检出胃以外部位,如牙斑、粪便内的幽门螺旋杆菌,还可用于流行病学调查,它的敏感性远远超过了其他方法,有利于确定细菌感染的来源及途径,它是一种很有前途的幽门螺旋杆菌检测方法。
异常结果:测定Hp有关毒力因子基因的mRNA(信使核糖核酸)的存在。 需要检查人群:
消化性溃疡,
慢性胃炎患者。
不适宜人群:1)凝血功能差者。(2)胃血管瘤(质软) 检查前禁忌:1.检查前一天避免吸烟,以免检查时因咳嗽影响插管。 2.要有成人亲友陪伴,术前取下假牙。 3.检查前一天晚饭后不应再吃东西,检查当天早晨不应再喝水。 检查时禁忌:1.告知医生您的既往病史及
药物过敏史。 2.嘱病人在操作中不要做过多的吞咽动作,防止唾液吸入气道及引起喉头疼痛。 3. 向病人说明胃镜检查的目的,鼓励病人树立信心,勿紧张,配合医生顺利完成检查。抽取胃粘膜检查即可。 4.准备好基因片段,保证电泳完成。
1材料:标本采自经胃镜检查确诊的胃、
十二指肠溃疡、各类胃炎及溃疡合并胃炎病例,在距幽门口5cm内钳取胃粘膜2份(每例检查前2周停用抗HP药物),分别作PCR及病理切片检查,检测HP。 2研究方法:PCR技术:采用厦门长城生物工程有限公司生产的HPDNAPCR诊断试剂盒,DNA抽提采用水煮沸法,引物为尿素酶基因片段,其核着酸顺序为:引物1为5'-AAGCTTTTATTAGGGGTTT—3',引物2为5'-TTATTACGCTTC—3',扩增产物为456bP,94℃预变性5分钟,94℃30秒,55℃30秒,72℃1分钟共32个循环,72℃延伸5分钟,2%琼脂糖凝胶电电泳20分钟, BE染色在456bp出现条带为阳性, 根据阳性带亮度分别作、定量判断。电