红细胞裂解液(Red Blood Cell Lysis Buffer,或称 ACK Lysis Buffer)是一种去除红细胞最简便易行的方法,即用裂解液裂解红细胞,它既不损伤
有核细胞又能充分的去除红细胞。裂解液裂解是一种比较温和的红细胞去除方法,主要用于经酶消化分散的
组织细胞的
分离纯化,
淋巴细胞的分离纯化以及组织细胞蛋白与核酸提取等实验中红细胞的去除。经红细胞裂解液裂解得到的组织细胞中不含红细胞,可进一步用于
原代培养、
细胞融合、流式细胞分析、核酸与蛋白的分离和提取等。
2.从4℃冰箱中取出ELS裂解液,按1:3-5的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入3-5ml裂解液),轻轻吹打
混匀;
2.取出4℃冰箱
预冷的ELS裂解液,按1:6-10的比例向细胞沉淀中加入ELS裂解液(1ml细胞压积加入6-10ml裂解液),轻轻吹打混匀;
6.重悬细胞,用于后续实验;如提取RNA,最好是于步骤4开始使用
DEPC水配制的溶液进行。
氯化铵是红细胞裂解液的主要效应物质,氨根离子不能通过
细胞膜,而其他离子可以通过,造成细胞内外的
离子浓度差异,形成了
渗透压差,外部的水分会扩散至细胞内,使红细胞膨胀,达到裂解的效果。