索氏提取法,又名连续提取法、
索氏抽提法,是从固体物质中
萃取化合物的一种方法。索氏提取法,用于粗脂肪含量的测定。脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中,测定脂肪的含量,可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。国内外普遍采用抽提法,其中索氏抽提法(Soxhlet extractor method)是公认的经典方法,也是我国粮油分析首选的标准方法。此法花费时间较长,在实验室多采用
脂肪提取器(
索氏提取器)来提取。
原理
利用溶剂回流和
虹吸原理,使固体物质每一次都能为纯的溶剂所萃取,所以萃取效率较高。萃取前应先将固体物质研磨细,以增加液体浸溶的面积。然后将固体物质放在滤纸套内,放置于萃取室中。安装仪器。当溶剂加热沸腾后,蒸汽通过导气管上升,被冷凝为液体滴入提取器中。当液面超过虹吸管最高处时,即发生
虹吸现象,溶液回流入烧瓶,因此可萃取出溶于溶剂的部分物质。就这样利用溶剂回流和虹吸作用,使固体中的可溶物富集到烧瓶内。
由于
有机溶剂的
抽提物中除脂肪外,还或多或少含有
游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质,因而索氏提取法测定的结果只能是
粗脂肪。
实验材料
油料作物种子、中速滤纸
仪器
索氏提取器,干燥器(直径15~18cm,盛变色硅胶),不锈钢镊子(长20cm) ,培养皿,
分析天平(感量0.001g),称量瓶,
恒温水浴,烘箱,样品筛(60目)。
应用
适用范围
适用于商品粮食、油料中粗脂肪含量的测定。
原理
试剂
海砂
仪器设备
分析天平:感量0.0001 g
索氏抽提器一套(各部件必须洗净,用105℃温度烘干,其中抽提瓶烘至恒重);
试样制备
禾谷类粮食和豆类(花生除外)分取除去杂质的净试样30~50 g,磨碎通过直径1.0 mm圆孔筛装入广口瓶内备用。
操作步骤
预试验
空白试验
样品测定
1 精密称取2~5g试样(可取测定水分后的样品),必要时拌以海砂,全部移入滤纸筒内。
2 将滤纸筒放入脂肪抽提器内,连接已干燥至恒重的接受瓶,由抽提器抽提冷凝管上端加入无水乙醚或石油醚至瓶内容积的2/3处,于水浴上加热,使乙醚或石油醚不断回流提取,一般抽提6~12小时。
3 取下接受瓶,回收乙醚或石油醚,待接受瓶内乙醚剩1~2ml时在水浴上蒸干,再于95~105℃干燥2小时,放入干燥器内冷却0.5小时后称量。
工作曲线
结果计算
X1= (m1-m0)/m2 x 100
式中: X1—样品中脂肪的含量,%
m1—接受瓶和脂肪的质量,g
m0—接受瓶的质量,g
m2—样品的质量,g
精密度
双试验结果允许差:粮食、油料不超过0.4%
参考文献
GB 5009.6-85 食品中脂肪的测定方法。
注意事项
脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中,测定脂肪的含量,可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法,如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和
核磁共振法等。国内外普遍采用抽提法,其中索氏提取法(Soxhlet extractor method)是公认的经典方法,也是我国粮油分析首选的标准方法。
索氏抽提法以索氏提取器为提取仪器,采用低沸点有机溶剂(乙醚或石油醚)回流抽提,除去样品中的粗脂肪,以样品与残渣重量之差,计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外,还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂肪物质,因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。
河南农业大学自2006 年开设
农产品标准化与贸易专业以来,农产品中脂肪含量测定实验一直是本专业的本科生主要实验之一,结合近年来实验教学中总结的一些体会,笔者就索氏提取法测定农产品中脂肪含量实验中试剂选择、样品处理、提取等几个注意事项进行探讨。
抽提试剂的选择
利用相似相溶规律,农产品中脂肪极性一般较小,可采用石油醚或乙醚作为抽提试剂。常见实验室用石油醚有低沸程(30~60℃)和高低沸程(60~90℃)两种,一般选用低沸程石油醚为抽提溶剂有利于缩短提取时间。若选择乙醚为抽提试剂,则必须十分注意乙醚的安全使用。抽提室内应严禁有明火存在或用明火加热。乙醚中不得含有
过氧化物,保持抽提室内良好通风,以防燃爆。乙醚中过氧化物的检查方法是:取适量乙醚,加入碘化钾溶液,用力摇动,放置1min,若出现黄色则表明存在过氧化物,应进行处理后方可使用。处理的方法是:将乙醚放入
分液漏斗,先以1/5 乙醚量的稀KOH 溶液洗涤2~3 次,以除去乙醇;然后用盐酸酸化,加入1/5 乙醚量的FeSO4 或Na2SO3 溶液,振摇,静置,分层后弃去下层水溶液,以除去过氧化物;最后用水洗至中性,用无水CaCl2 或无水Na2SO4 脱水,并进行重蒸馏。
样品粉碎度
试样粗细度要适宜。试样粉末过粗,脂肪不易抽提干净;试样粉末过细,则有可能透过滤纸孔隙随回流溶剂流失,影响测定结果。
实验中的干燥处理
测定用样品、抽提器、抽提用有机溶剂都需要进行脱水处理。这是因为:(1)抽提体系中若有水,会使样品的水溶性物质溶出,导致测定结果偏高;(2)抽提体系中若有水,则抽提溶剂易被水饱和(尤其是乙醚,可饱和约2%的水),从而影响抽提效率;(3)样品中若有水,抽提溶剂不易渗入细胞组织内部,结果不易将脂肪抽提干净。
抽提过程中注意事项
将装有样品的滤纸包用长镊子放入抽提筒中,注入一次虹吸量的1.67 倍的石油醚,使样品包完全浸没在石油醚中。连接好抽提器各部分,接通冷凝水水流,在恒温水浴中进行抽提,调节水温在70~80℃之间,使冷凝下滴的乙醚成连珠状(120~150 滴/min 或回流7 次/h 以上),抽提至抽取筒内的乙醚用滤纸点滴检查无油迹为止(约需6~12h)。抽提完毕后,用长镊子取出滤纸包,在通风处使乙醚挥发(抽提室温以12~25℃为宜)。提取瓶中的乙醚另行回收。
其他方面
(1)索氏抽提法测定脂肪最大的不足是耗时过长,如能将样品先回流1~2 次,然后浸泡在溶剂中过夜,次日再继续抽提,则可明显缩短抽提时间。
(2)若实验中样品较多的话,可采用容量更大的YG- Ⅱ型油分测定器来测定脂肪含量,温度控制在70℃左右,8h 可提取完毕。