祝希娟，1938年1月17日出生于江西省
赣州市，原籍江西省南昌市，中国内地女演员，毕业于上海戏剧学院表演系。
1952年，还在念初中的祝希娟参演了由
赵丹执导的剧情电影《
为孩子们祝福》。1957年，祝希娟考入
上海戏剧学院表演系。1960年，从学校毕业后担任了上海戏剧学院实验话剧团、上海青年话剧团的演员。
1961年，与
王心刚合作主演战争电影《
红色娘子军》，在片中饰演性格顽强、泼辣、勇敢、朴实的吴琼花，她凭借该片获得首届大众电影百花奖最佳女演员奖。
1962年，与
王尚信、
王熙岩联合主演剧情电影《
燎原》；同年，祝希娟被中国文化部评为中国电影二十二大影星。1964年，与赵丹、
高博联合主演剧情电影《
青山恋》。1974年，与王志刚、
娄际成联袂主演剧情电影《
无影灯下颂银针》，该片根据上海市胸科医院业余文艺创作组的同名话剧改编。
1979年，与
张勇手搭档主演改编自真实事件的剧情电影《
啊！摇篮》，在片中饰演骁勇善战、倔强冷静且做事雷厉风行的李楠。1981年，与
李家耀合作主演剧情电影《
模范丈夫》；同年，与宋玉华等共同主演话剧《
再见了，巴黎》。
1983年，担任深圳电视台副台长兼深圳电视艺术中心主任，并成为了该台第一位节目主持人。1985年，策划推出反映深圳2万名工程兵的剧情电影《
男性公民》。1987年，凭借主演的话剧《裂变》获得第2届广东艺术节表演一等奖。
1988年，编剧并主演了深圳特区记录片《
迷人的年轻城》。1989年，祝希娟担任深圳电视台电视艺术中心主任；8月19日，由其出演的剧情电影《
最后的贵族》上映，该片改编自白先勇的短篇小说《谪仙记》。1991年，凭借电视剧《法人代表》获得第5届中南区电视剧金帆奖优秀女演员奖。
1996年8月，祝希娟开始向美国进军，她率领深圳电视艺术中心摄制组前往洛杉矶与美国上海洛杉矶娱乐公司合作，并参演了电视剧《
百老汇100号》，该剧以剧中人林贝贝的自述形式展开。1997年，与
葛优、
陈道明共同主演古装剧《
寇老西儿》。
1998年9月，祝希娟退休后告别深圳，与
侯烽民一起到美国洛杉矶定居，后来与好友连手创办了“美国琼花影视艺术公司”，祝希娟担任总裁；同年，与杨绍林共同主演军事剧《
魂系哈军工》。2001年，在
刘佳、
侯天来主演的都市剧《
再婚家庭》中饰演白如雪母亲。
2002年，出演喜剧电影《
送你送到小城外》。2003年，与
孙思瀚、
伍宇娟联袂主演刑侦剧《
忠诚卫士》。2004年，由其参演的亲情剧《
亲情树》首播。2005年，与
柳云龙共同出演谍战剧《
暗算》，该剧改编自麦家的同名小说。2006年，出演以养老院为背景的剧情电影《
老人的故事》。
2013年，出演根据申纪兰真人真事改编的传记电影《申纪兰》。2014年2月4日，获得全国德艺双馨10周年大型公益活动“德艺双馨终身成就奖”称号。2016年，与
刘敏涛、
刘佩琦联合出演当代乡村剧《
守婚》。2017年，领衔主演文艺电影《
大雪冬至》，她凭借该片入围第9届澳门国际电影节最佳女主角奖，获得第20届上海国际电影节电影频道传媒关注单元评委会特别荣誉奖；9月，祝希娟获得第16届中国电影表演艺术学会金凤凰奖特别荣誉奖；11月，祝希娟获得第27届中国金鸡百花电影节终身成就奖；12月，祝希娟获得第9届澳门国际电影节华语电影终身成就奖。
2020年，领衔主演由
张唯执导的剧情电影《
空巢》，该片讲述了一位老教师和外来务工小伙子的故事；9月，获得新时代国际电影节庆祝新中国成立70周年全国十佳电影女演员奖。
2021年7月16日，友情出演的打拐题材正能量电影《
天下无拐》全国上映；6月26日，参演《
百年礼赞——庆祝中国共产党成立100周年大型交响音诗画》，讲解：油画《深圳拓荒牛》。
2022年5月，应邀参演纪念毛泽东同志《在延安文艺座谈会上的讲话》发表八十周年暨庆祝大众电影百花奖创立六十周年特别节目。7月30日晚，第36届大众电影百花奖形象大使朱一龙将与第一届百花奖最佳女主角得主祝希娟一起，讲述《花开甲子 感谢观众》，为走过60年芳华的百花奖点题。10月20日，特别出演的院线电影
《爸爸的谎言》播出。
祝希娟善于运用她所具有的爽朗气质因素进行人物形象创造。在话剧《无事生非》中，她以明亮、清丽的风格，创造了带有喜剧情趣的文艺复兴时期新女性贝特丽丝的形象。在话剧《再见吧！巴黎》中，她创造的陶解放形象，表明其创作已趋成熟，并能运用生活洞察中感受到的复杂因素，用性格化的技巧来进行创造（中国网评）。