冠状病毒(Coronavirus)在
病毒分类学上是冠状病毒科的一个病毒属,属于单链正译
RNA病毒。冠状病毒科病毒只感染
脊椎动物,与多种动物和人的疾病有关。冠状病毒科原先只包含1个属,即冠状病毒属。
病原
犬冠状病毒病(ccv)属冠状病毒科冠状病毒属成员。病毒具有冠状病毒的确一般
形态特征,呈圆形或椭圆形,长径80~120nm,宽径为75~80nm,有
囊膜,囊膜表面有花瓣状纤突,长约20nm,
冻融极易脱落,失去
感染性。
核衣壳呈螺旋状。病毒
基因型为单股
RNA。病毒在CsCL中的浮密度为1.15~1.16克/立方厘米。病毒对氯仿、
乙醚、脱氧胆酸盐敏感。对热也敏感。用甲醛、
紫外线能灭活。对
胰蛋白酶和酸有
抵抗力。病毒在粪便中存活6~9天。
流行病学
本病可感染犬、貂和
狐狸等
犬科动物,不同品种、性别和年龄犬都可感染,但幼犬最易感染,发病率几乎100%,
病死率50%.病犬和带毒犬是主要
传染源。病毒通过
直接接触和
间接接触,经
呼吸道和消化道传染给健康犬及其他易感动物。本病一年四季均可发生,但多发于冬季。气候突变,卫生条件差,犬群密度大,断奶转舍及长途运输等可诱发本病。
发病机制
本病毒经口接触易感犬2天后,到达
十二指肠上部,主要侵害
小肠绒毛2/3处的消化吸收细胞。病毒经
胞饮作用进入
微绒毛之间的肠细胞,在
胞质空泡的平滑膜上出芽。由于
细胞膜破裂,病毒随脱落的感染细胞进入
肠腔内,
再感染小肠整个肠段的绒毛
上皮细胞,进而绒毛短粗,
消化酶和肠吸收功能丧失,导致腹泻。以后随着小肠结构的复原,临床症状消失,排毒减少并终止,血清中产生
中和抗体。
症状
潜伏期1~5天,临床症状轻重不一。主要表现为呕吐和腹泻,严重病犬精神不振,呈
嗜睡状,食欲减少或废绝,多数无体温变化。口渴、鼻尖干燥,呕吐,持续数天出现腹泻。粪便呈粥样或水样,红色或暗褐色,或黄绿色,恶臭,混有黏液或少量血液。白细胞数正常,病程7~10天,有些病犬尤其是
幼犬发病后1~2天内死亡,
成年犬很少死亡。
病理变化
剖检病变主要是
胃肠炎。肠壁菲薄、肠管内充满白色或黄绿色、紫红色血样液体,胃肠粘膜充血、出血和脱落,胃内有黏液。其它如
肠系膜淋巴结肿大,
胆囊肿大。
组织学检查主要见
小肠绒毛变短、融合、
隐窝变深,绒毛长度与隐窝深度之比发生明显变化。
上皮细胞变性,
胞浆出现空泡,黏膜
固有层水肿,
炎性细胞浸润,上皮细胞变平,
杯状细胞的
内容物排空。
诊断
1、电镜检查 去粪便用
氯仿处理,
低速离心,取
上清液,低于铜网上,经
磷钨酸负染后,用
电子显微镜观察是否有特殊形状的
病毒粒子。该法快速。去上清液与
免疫血清作用,使病毒粒子
特异性凝集,则有助于诊断。2、
病毒分离鉴定 取典型病犬新鲜粪便,经常规处理后,接种于A72细胞或犬肾
原代细胞上培养,用特异抗体染色检测是否存在病毒,或待细胞出现
CPE后,用已知阳性血清作
中和试验鉴定病毒。为提高病毒分离率,粪便要新鲜,避免反复冻结,最好先将
病料先感染健康病犬,取典型发病犬
腹泻粪便作为样品分离病毒。此外,中和试验、乳胶凝集试验、
ELISA等方法也可诊断本病检测
血清抗体。
防治
本病尚无有效疫苗预防和
特效疗法。发现病犬为减少
死亡率应隔离病犬并用0.2%~1%
甲醛或1:30
漂白粉,彻底消毒场地。
注意
发现犬由此不良症状后应及时到有
宠物医师资格证书的正规
宠物医院救治。此病在治疗时,应与犬细小病毒症状
相分离鉴别,应用正规试纸板(CCV检测试纸)进行测试确诊并配合相应
对症治疗。
狗狗检测
诊断要点
1.流行特点:犬冠状病毒病多发于寒冷的冬季,传播迅速,数日内常成窝暴发。本病的发生虽无品种、年龄、性别之分,但在犬群中流行时,通常都是幼犬先发病,然后波及其他年龄的犬。幼犬的发病率和致死率均高于成年犬。
2.临床特征:幼犬症状重剧,呕吐和腹泻是本病的主要症状。病初呕吐持续数天,至出现腹泻后,呕吐减轻或停止。腹泻物呈糊状、半糊状乃至水样,橙色或绿色,水样便中常含有粘液和血液。病犬精神沉郁、喜卧、
厌食,但体温一般不高。
成年犬症状轻微。 本病的临床症状和
流行病学与
轮状病毒感染相似,而且常与轮状病毒、犬细小病毒等
混合感染,诊断较为困难。因此,运用实验室检验,如粪便
病料的电镜检查、病毒分离或
荧光抗体检查对本病的确诊具有重要意义。
防御措施
犬冠状病毒病尚无特效疫苗供免疫用主要采取一般性综合措施,可参照“
犬轮状病毒感染”的防治措施。对病犬主要采取对症治疗,停喂含
乳糖较多的牛奶,多酶片、乳酸菌片。口服补液盐,
静脉滴注复方氯化钠液,喂给以纠正脱水与
电解质紊乱。肌注
地塞米松,以改善
微循环和治疗体。
检测原理
酶标板的孔中包被有纯化的
冠状病毒抗原。从
金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus提取的蛋白A与HRP结合成复合物。血清或血浆样品和蛋白A酶
标记物一起在酶标板的孔中孵育。如果猫样品里存在FCoV抗体,抗体将与孔中的抗原结合,再与蛋白A
酶标记物结合。多余的酶标记蛋白A被洗掉,加入发色底物。清晰的蓝色表示FCoV抗体存在,没有
颜色变化表明没有FCoV抗体。
该试剂盒具有高特异性和灵敏度,操作简单,30分钟内可以知道结果。试剂盒里包括阳性质控和阴性质控,仅需肉眼通过与阴性质控颜色进行比较,就可以准确地判断样品里FCoV抗体的存在。
样品
需1ul血清或血浆,只能检测猫的样品。样品可在2-8C保存7天,如果需要更长的保存,样品可保存在-20C。严重
红细胞溶解或脂溶血会产生干扰的颜色,所以尽可能去得到更好质量的样品。
准备洗涤液
让洗涤浓缩液达到室温,轻轻地倒置
混匀。用
蒸馏水或
去离子水稀释洗涤浓缩液(1份洗涤浓缩液加至9份水中),稀释后的
洗涤液可保存于2-7C。
结果
a. 检测的
有效性必须是:阳性质控孔里的液体呈清晰的蓝色,而阴性质控孔里的液体保持清澈。
b. 假若样品孔的颜色变化比阴性质控
孔深很多则表明,该动物以前或正受到FCoV感染,并且有可能通过
排泄物传播病毒。此时便需要与其它的
临床数据结合起来以确诊FIP。
c. 如果样品孔里无颜色变化表明没有感染FIP疾病。
试剂盒组份
以下内容物包含在试剂盒里:
阳性质控血清 1.5ml
阴性质控血清 7.0ml
蛋白A HRP标记物 5.0ml
TMB 7.0ml
浓缩洗涤液 100.0ml
注意事项
* 试剂盒使用前恢复至室温(21-25C)
* 不同样品使用不同的加样器头
* 不要把试剂盒直接暴露在阳光下
* 不要使用过期的试剂或不同试剂盒里试剂一齐混杂使用
* 严格按照步骤操作,不适当的洗涤或试剂污染将产生非专一性的颜色
* 仅限兽医使用
保存和稳定性
将试剂盒和稀释的洗涤液保存于2-7C,不要冷冻。只要在适当保存条件下,试剂在有效期内是稳定的。