UNG酶的作用原理是选择性水解断裂含有dU的
双链或
单链DNA中的
尿嘧啶糖苷键,形成的有缺失
碱基的DNA链,在
碱性介质以及高温下会进一步水解断裂,从而被消除.UNG酶的最佳活性温度为50℃,95℃
灭活。
为保证
PCR结果的
准确性,要预防非
特异性PCR扩增和污染。常用的措施是使用UNG酶(Uracil-N-Glycosylase)和
Taq酶热启动。PCR反应最常见, 最重要的污染物是PCR产物,防污染
热启动PCR试剂盒以dUTP取代
dTTP,所以PCR产物都是含有dU的
DNA链。在PCR开始前增加50℃的保温步骤,UNG酶即可将反应体系中已有的U-DNA污染物中的尿嘧啶
碱基降解,并在随后变性这步的条件下
DNA链断裂,消除由于污染DNA产生的扩增,从而保证扩增结果的特异性,准确性。同时UNG酶被灭活,不会再降解新扩增的产物U-DNA。
· 克隆有Ecoli K12 Uracil-N-Glycosylase 基因的
大肠杆菌经诱导表达后,再经三次
过柱纯化分离出来的
重组蛋白。分子量25.66 KDa。
· 反应条件: 50 ℃ ,2 分钟;反应 buffer: 20mM
Tris-HCl(
PH:8.0); 1mM
EDTA; 1mM
DTT 。