Taq酶是从
水生栖热菌 Thermus Aquaticus ( Taq )中分离出的具有
热稳定性的
DNA聚合酶。一般常用的Taq酶可以分为rTaq酶和LTaq酶两类,LTaq酶的
保真性更强,
耐热性也比rTaq酶好。
对于PCR的应用有里程碑的意义,
PCR循环包括
变性(90 °C左右)、
退火(50°C左右)、延伸(70°C左右),每一步对温度的要求都不一样,多数酶在高温时即变性
失活,然而该酶可以耐受90℃以上的高温而不失活,所以不需要每个循环加酶,使
PCR技术变得非常简捷。同时也大大降低了成本,PCR技术得以大量应用,并逐步应用于临床。
在应用Taq
DNA聚合酶进行PCR
反应时,变性往往在94~95°C条件下进行,这也是
Taq DNA 聚合酶进行30个或者30个以上PCR循环而活力不受到过多损失时所能耐受的
最高温度。然而这种酶的
保真度不高,因为这种酶的DNA
聚合作用依赖于3'-5’校正。
与一般酶不同,用Taq酶扩增DNA时常使片段3'端凸出一个A,应注意.这是因为TaqDNA聚合酶具有一种非模板依赖的
末端转移酶活性(延伸活性),导致扩增DNA片段在3'末端附加单个的未配对的
核苷酸。