TRIZOL是一种新型总
RNA抽提试剂，可以直接从细胞或组织中提取总RNA。其含有苯酚、
异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞并
抑制细胞释放出的
核酸酶。TRIZOL的主要成分是苯酚。TRIZOL在破碎和溶解细胞时能保持RNA的完整性，因此对纯化RNA及标准化RNA的生产十分有用。
主要成分
TRIZOL的主要成分是
苯酚。苯酚的主要作用是裂解细胞，使细胞中的蛋白，
核酸物质解聚得到释放。苯酚虽可有效地
变性蛋白质，但不能完全抑制
RNA酶活性，因此TRIzol中还加入了8－
羟基喹啉、
异硫氰酸胍、
β-巯基乙醇等来抑制内源和
外源RNase（RNA酶）。
TRIZOL是从细胞和组织中提取总RNA的即用型试剂，在样品裂解或匀浆过程中，TRIZOL能保持RNA完整性。加入
氯仿后，溶液分为
水相和
有机相，RNA在水相中。取出水相，用
异丙醇可沉淀回收RNA。
※0.1%的8－羟基喹啉可以抑制RNase，与氯仿联合使用可增强
抑制作用。
※异硫氰酸胍属于解偶剂，是一类强力的
蛋白质变性剂，可溶解
蛋白质并使
蛋白质二级结构消失，导致
细胞结构降解，
核蛋白迅速与核酸分离。
※
β-巯基乙醇的主要作用是破坏RNase蛋白质中的
二硫键。
基本特点
Trizol试剂可以快速提取人、动物、植物、细菌不同组织的总
RNA，该方法对少量的组织（50-100 mg）和细胞（5×106）以及大量的组织（≥1 g）和细胞（>107）均有较好的分离效果。TRIZOL试剂操作上的简单性允许同时处理多个的样品。所有的操作可以在一小时内完成。TRIZOL抽提的总RNA能够避免
DNA和蛋白的污染。故而能够作RNA 印迹分析、
斑点杂交、poly(A)+ 选择、
体外翻译、
RNA酶保护分析和
分子克隆。并且利用DNA、RNA和
蛋白质在不同溶液中的溶解性质，可以通过分层分别将不同层中的RNA（上层）、DNA（中层）、蛋白质（下层）
分离纯化出来，效率极好。
Trizol试剂能促进不同种属不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从
大鼠肝脏抽提的RNA
琼脂糖凝胶电泳并用
溴化乙啶染色，可见许多介于7 kb和15 kb之间
不连续的高分子量条带，（
mRNA和
hnRNA成分）两条优势
核糖体RNA条带位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1 和 0.3 kb之间 (
tRNA,5S）。当抽提的RNA用TE稀释时其A260/A280比值≥1.8
使用方法
该法从细胞中提取RNA——用
匀浆器将组织磨碎，加入TRIzol处理组织。5分钟后加入氯仿，以每分钟12000转离心5分钟，样品即分成水样层、中间层和
有机层。
※RNA存在于水样层中，收集水样层后可以通过异丙醇沉淀RNA来还原。
※在除去水样层后，中间层中的
DNA和蛋白质也能相继以沉淀的方式还原：
乙醇能使中间层的DNA沉淀析出，在中间层中加入异丙醇能沉淀出蛋白质。
每100ml TRIzol可以抽提100个六孔板中的样品或100个50-80mg的组织样品。无论样品是人、动物、植物还是细菌组织，该方法对少量的组织（50-100mg)和细胞（约五百万个）及大量的组织（≥1g）和细胞（超过一千万个）均有较好的分离效果。
每一百万细胞用TRIzol抽提可得5-15微克
RNA，每毫克组织用TRIzol抽提可得1-10微克RNA（产量因细胞和组织不同而异）。
TRIzol操作上的简便性允许其同时处理多个样品，所有的操作可以在一小时内完成。
TRIzol抽提的总RNA能够避免DNA和蛋白质的污染，故而能够作RNA 印迹分析、斑点杂交、poly(A)+ 选择、体外翻译、RNA酶保护分析和单
分子克隆（
PCR）。
※如果是用于PCR，当两条
引物位于单一
外显子内时，建议用级联扩大的
DNase I(Cat. No. 18068）来处理抽提的总RNA。
※TRIzol试剂能促进不同种属、不同分子量大小的多种RNA的析出。例如，从
大鼠肝脏抽提的RNA经过
琼脂糖凝胶电泳并用
溴化乙啶染色，可见许多介于7kb和15kb之间的
不连续的高分子量条带（
mRNA和
hnRNA成分），两条优势
核糖体RNA条带位于~5 kb （28S）和~2 kb （18S），低分子量RNA介于0.1和0.3kb之间 (
tRNA,5S）。当抽提的RNA用TE稀释时，其A260/A280比值≥1.8。抽提小RNA时宜-70℃沉淀过夜。
TRIzol对人体有害，使用时应戴
一次性手套，注意防止溅出。
⒈样品的制备 当样品富含蛋白质，脂肪，多糖或是细胞外物质例如肌肉，
脂肪组织和植物的
块茎部分时可能需要一额外的分离步骤。
匀浆化后在2—8°C的条件下以12,000×g的
离心力离心10分钟，移除匀浆中不溶解的物质，余下的沉淀中包含有细胞
外膜，多糖，以及高分子量DNA，而上层的超
浮游物含有RNA。在来自于脂肪组织的样品中，大量的脂肪漂在最上层因而应该除掉。在每一个个案中，将清亮的匀浆溶液转移到一干净的试管中加入
氯仿并继续进行下述的分离步骤。
⒉ 分离阶段 将匀浆样品在15—30°C条件下孵育5分钟以使
核蛋白体完全分解。每1 ml TRIZOL加0.2 ml氯仿。盖紧样品管盖，用手用力摇晃试管15秒并将其在30°C下孵育2—3分钟。在2—8°C下以不超过12,000×g的
离心力高速冷冻离心15分钟。离心后混合物分成三层：下层红色的苯酚-氯仿层，中间层，上层无色的水样层。RNA无一例外地存在于水样层当中。水样层的容量大约为所加TRIZOL容量的60%。
⒊ RNA的沉淀 将水样层转移到一干净的试管中，如果希望分离DNA和蛋白，有机层同样要予以保留。通过将水样层和
异丙醇混合来沉淀RNA。最初均化时的每1 ml TRIZOL对应0.5 ml异丙醇。将混合的样品在15—30°C条件下孵育10分钟并在2—8°C下以不超过12,000×g的离心力高速冷冻离心10分钟。RNA沉淀在离心前通常不可见，形成一胶状片状沉淀附着于试管壁和管底。
4 .RNA的洗脱 移去上层悬液。用75%的乙醇洗涤RNA沉淀一次，每1 ml的 TRIZOL至少加1 ml的75%乙醇。旋涡振荡混合样品并在2—8°C下以不超过7,500×g的离心力高速冷冻离心5分钟。
⒌ RNA的再溶解 在操作的最后，简单干燥RNA沉淀（
空气干燥或
真空干燥5—10分钟）不要在
真空管里离心干燥RNA。尤为重要的是，不能让RNA沉淀完全干燥那样会极大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA样品其A260/280比值< 1.6。用
移液管尖分几次移取无RNA酶的水或0.5%
SDS溶液来溶解RNA，并在55—60°C下孵育10分钟（当RNA以后要用于
酶切反应时，避免使用SDS。）RNA还能被100%
甲酰胺（除去离子）再溶解并保存在–70°C。
RNA抽提注意事项
⒈从少量的组织（1—10 mg）或细胞（102—104）中分离RNA 样品：往组织或细胞中加入800
µ;l TRIZOL。待样品裂解后，加入氯仿并进行步骤2中的抽提操作。在用异丙醇沉淀RNA之前，加入5—10
μg无RNA酶的
脂质体（
注射器抽吸两次以切断
基因组DNA。
脂质体会留在水样层中并和RNA共析出。在浓缩到4 mg/ml之前它不会抑制第一
丝状体的合成也不会抑制PCR。
⒉在匀化后和加入氯仿之前，样品可以在–60—–70°C保存至少一个月。RNA沉淀（步骤4，RNA洗脱）溶于75%的乙醇在2—8°C至少可以保存一周，在–5—–20°C下至少可保存一年。
⒊
台式离心机最大能达到2,600×g的离心力，如果将离心时间延长到30-60分钟可以满足步骤2和步骤3中的操作。
配制方法
500ml重蒸苯酚；
⒘6mL 0.75M 柠檬酸钠溶液（pH≥7）
26.4mL 10%sarcosy（
十二烷基肌氨酸钠）溶液
50mL 2M NaAc溶液（pH≥4）
TRIzol需4℃
低温保存，
保质期约一年。100mL TRIzol试剂市场售价约478元
人民币。
注释：⑴水和苯酚部分
互溶，Trizol中苯酚被水饱和，形成均匀溶液；⑵NaAc等
盐类的作用是提供缓冲环境。
选择
互溶，Trizol中苯酚被水饱和，形成均匀溶液；⑵