PCR标记法
dNTP换成标记物标记成dNTP的一种方法
PCR标记法是在PCR反应底物中,将一种dNTP换成标记物标记成dNTP的一种方法, 这样标记的dNTP就在PCR反应的同时掺入到新合成的DNA链上。这个过程通常以实验图的形式展示出来。
摘要
从固体平板挑取转化带有目的基因的单菌落,用特异引物通过聚合酶链式反应可直接扩增和标记目的基因,不需经过菌的液体培养、质粒提取和酶解反应等复杂过程,能快速获得目的基因扩增产物和进行目的基因探针的标记。
探针是核酸分子杂交及分子标记研究进行的必要前提,在Southern blot、Northern blot、ALFP、 RFLP、RAPD、SSR等技术中得到了广泛应用,在分子生物学的研究中充分发挥着作用,尤其对核酸分子操作具有十分重要的意义。因此,探针的制备与标记已成为核酸研究中最常规和普遍的技术,但目前的探针标记方法主要是将质粒或λDNA 经限制性内切酶酶解后分离目的片段,再用切口平移标记法或随机引物标记法进行标记,耗时很长且效率低,而用PCR聚合酶链式反应只须极少量的DNA模板(50~100ng),即可扩增出大量高效标记的目的片段,但仍需进行质粒的提取工作,最少也要2~3d才能完成全过程。为了进一步提高探针标记的效率,本试验进行PCR方法直接从菌中标记目的基因的研究,仅需2~3h即可获得高效率标记的探针,也可直接从具目的基因载体质粒中扩增出目的基因,同时适用于不需提取质粒DNA迅速鉴定细菌转化的转化子。 ----------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------