递减聚合酶链式反应
PCR聚合酶链式反应方法
递减PCR,亦称降落PCR(touchdown PCR)是一种PCR(聚合酶链式反应)方法,用来避免非特异性序列的扩增。PCR中引物的黏合温度(annealing temperature)决定了黏合的特异性,温度越高特异性越强,但过高则不能实现引物和模板的结合,而过低会产生大量非特异性产物。因此进行PCR时需要寻找合适的黏合温度。
简介
递减PCR,亦称降落PCR(touchdown PCR)是一种PCR(聚合酶链式反应)方法,用来避免非特异性序列的扩增。PCR中引物的黏合温度(annealing temperature)决定了黏合的特异性,温度越高特异性越强,但过高则不能实现引物和模板的结合,而过低会产生大量非特异性产物。因此进行PCR时需要寻找合适的黏合温度。
递减PCR开始先设定一个比较高的黏合温度,每个循环黏合温度下降1℃,到一个较低温度以后每个循环的黏合温度保持不变直到结束。在刚下降到特异性结合可以进行的最高温度时,可以达到最高的特异性。这样在起初的几个循环中,特异性扩增序列可以相对非特异性序列多扩增若干倍,从而减轻非特异性扩增对结果的干扰。这种方法可用于省去多次试验最佳黏合温度的工作。
此外,递减PCR还可与简并引物(degenerate primer)结合使用,用来推出一段已知肽链氨基酸序列所对应的DNA碱基序列。
聚合酶链式反应
聚合酶链式反应(英文:Polymerase chain reaction,缩写:PCR),是一种分子生物学技术,用于扩增特定的DNA片段,这种方法可在生物体外进行,不必依赖大肠杆菌酵母菌等生物体。这种方法由凯利·穆利斯(Kary Mullis)于1983年开发,当时他是Cetus公司的雇员,也是1993年诺贝尔化学奖的获得者,它是一种简单,廉价和可靠的方法复制DNA片段,这个概念适用于现代生物学和相关科学的许多领域。 PCR可能是分子生物学中使用最广泛的技术。这种技术被用于生物医学研究,犯罪取证和分子考古学。
微生物复制是一个费时耗力的流程,首先要将DNA经限制酶剪裁,再利用连接酶(Ligase)加到载体(Vector)中,之后利用瞬间电击(Electroporation)或是热休克(Heat Shock)的方式,送到大肠杆菌感受态细胞(competent cell)中,将此菌于培养皿大量繁殖培养,再经过繁复的分离、纯化过程,时间通常需要近一周,才能大量复制片段。所以仅需一小时的PCR能节省大量时间和繁复的操作,聚合酶链式反应技术被广泛地运用在医学生物学的实验室,例如用于判断检体中是否会表现某遗传疾病的图谱、传染病的诊断、基因复制,以及亲子鉴定
简并引物
用于聚合酶链式反应的特殊引子,含有化学合成的特殊碱基,能和多种碱基配对。用于让引子顺利配对到碱基稍有不同的DNA。 例如ATCGC*CTGG引子*表示能与TC结合的特殊碱基。能和TAGCGAGACC,TAGCGGGACC这两种稍有不同的DNA完全配对。
参考资料
最新修订时间:2022-08-25 16:43
目录
概述
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