锚定PCR(Anchored PCR)常用于扩增已知一端序列的目的DNA。在未知序列一端加上一段多聚dG的尾巴,然后分别用多聚dC和已知的序列作为引物进行PCR扩增。
用巢式基因特异性引物GPS2和能够与多聚胞嘧啶配对的锚定引物AAP对加尾的产物进行PCR扩增,将PCR产物连接到载体后进行序列测定,可以得到基因序列上游的未知序列。
AAP:GGCCACGCGTCGACTAGTACGGGIIGGGIIGGGIIG,I为次黄嘌呤核苷,多聚G上游包含Mlu I, Sal I 和 Spe I三个
酶切位点。
锚定PCR主要用于分析具有可变末端的DNA序列,Loh等用A-PCR对人外周血淋巴细胞T细胞受体α-链的mRNA的多变性进行了分析。先合成
cDNA,并用
末端脱氧核苷酸转移酶在其3’-可变区末端加上一个PolyG尾巴。Loh等恒定区与可变区连接部位设一个引物,另一个引物是一个具5’-polyG尾巴的引物。带有PolyG尾巴的引物是一个固定点,它可以并与PolyG尾巴结合,无论其余部分序列如何,只识别片段末端,利用此法可从前述mRNA中检出至少20种不同序列,每一种都是独特的,表明A-PCR不对任何特殊序列有倾向性结果,可用于T细胞、肿瘤及其它部位抗体基因的研究。