银染测序是由Proega公司推出的一种测序方法。它不使用
放射性同位素,而是使用较为敏感的银染色检测法来检测序列胶中的DNA条带。
由于银染法灵敏度低于
放射性同位素和荧光染料,因此它需要的
DNA量也较多。其基本原理是通过高灵敏度的银盐显色步骤来检测
末端终止法完成的测序凝胶条带。银染测序系统利用线性扩增,
热循环等步骤获得银染检测所需的足够DNA量,在一天内完成序列反应,电泳分离,并获得数据。该方法可以在电泳结束后一个半小时内得出结果,同时也省去了放射性同位素操作过程中的特殊防护措施。与
荧光染料标记方法比较,荧光及化学发光技术需要昂贵的试剂来标记引物或底物,同时需要昂贵的仪器来检测。银染色测序法使用普通的寡核苷酸引物,无需在引物5'-OH末端或底物进行任何修饰,也不需要复杂的仪器设备来检测结果,可以在显色后的胶上直接读序。该法快速、安全、费用低,而成为酶法测序分析中的重要测序系统。银染测序包括:模板制备;测序反应;序列胶电泳分离;银染显色 结果与读序。银染法测序凝胶制备方法同STR复合扩增产物银染检测,采用特殊方法分别处理测序凝胶的长短两块玻璃板,使电泳结束后凝胶能够附着在短玻璃板上,而与长玻璃板能够比较容易分离,凝胶在短玻璃板的托载下,能够方便地进行显色操作。