大部分血细胞内均存在酸性磷酸酶活性，胞质内的酸性磷酸酶在酸性条件下，经水解，再与硝酸铅、硫酸胺作用，可生成棕黄色或棕黄色的硫酸铅沉淀。

阳性：粒细胞、T淋巴细胞、浆细胞、巨核细胞、血小板、幼红细胞和单核-巨噬系统细胞。

酸性磷酸酶染色能帮助鉴别戈谢细胞(呈阳性反应)及尼曼-皮克细胞(呈阴性反应);红血病及红白血病时幼红细胞呈核旁单侧阳性反应;多发性骨髓瘤细胞、急性单核细胞性白血病、恶性组织细胞增生症细胞、多毛细胞白血病、T淋巴细胞性白血病等均呈强阳性反应。

酸性磷酸酶染色，必要时加做L-酒石酸抑制试验，即为酸性磷酸酶染色被酒石酸抑制;反之则不被酒石酸抑制，产生不溶性红色沉淀，定位于胞质内。这对鉴别诊断多毛细胞白血病有重要意义(L-酒石酸抑制试验仍呈阳性)，而多发性骨髓瘤细胞，急性单核细胞性白血病细胞、恶性组织细胞增生症细胞均可被L-酒石酸所抑制，阳性反应明显减弱。