1991年，刚初中毕业的她放弃了上高中或其它中专的选择，考上
汕头文化艺术学校群艺系。在校期间她便开始客串拍广告片，并于1994年参与了警匪片《
警魂》的拍摄。
1995年，郑佳欣参加高考并报考了中央戏曲学院，但因普通话不纯正而落榜。1996年，郑佳欣再次报考，最终以专业分数全国第二名的优异成绩考进了北京电影学院表演系，成为
黄晓明、
陈坤、
赵薇的同班同学。
1998年4月，参与拍摄古装清朝喜剧《还珠格格》，饰演抛绣球相亲的杜家小姐杜若兰。同年，出演历史剧《
戊戌风云》。
1999年，出演古装武侠剧《
小李飞刀》，饰演冷艳媚人的美人林仙儿，并开始受到大众关注。2000年，与王学圻、何赛飞合作主演都市情感剧《
爱是阳光》，在剧中饰演放荡的反叛女孩李冠英。2002年，与洪金宝合作主演警匪剧《
特警飞龙》，饰演美艳阴毒的黑社会女老大倪虹。
2005年1月，与周浩东合作主演剧情片《
西域情仇》；5月，出演家庭伦理剧《
哑巴新娘》，饰演性格坚强叛逆的青楼女子苏凤；12月，出演爱情奇幻电影《
情癫大圣》，在片中饰演一位蜥蜴美女。
2010年，出演古装悬疑剧《
龙行天下之糊涂县令妙钦差》，饰演乌夫人湘琴。2011年，出演古装武侠剧《
龙游天下3》，再度与杜军泽饰演一对夫妻。2013年，郑佳欣出演的古装剧《
龙巡天下之断臂观音》播出，她则在剧中饰演隐忍贤良的传统妇女心兰。
2015年，郑佳欣与“96明星班”首次合体，并集体出演都市轻喜剧《
虎妈猫爸》。
2016年1月，与马少骅、关晓彤合作主演励志年代剧《
搭错车》，饰演身陷“家暴”的返乡知青佟燕。随后，受邀出席中国青少儿短片艺术大赛颁奖典礼，为获奖选手开奖。
《搭错车》让观众再度见证了郑佳欣对角色的理解和塑造。无论是返城知青、被家暴的妇女、儿子妈妈、还是被洗脑的“女强人”，都被其诠释的恰到好处，并成功的还原了上世纪的市井百姓特点，使观众重回到故事的情景之中。（新浪娱乐评）