建立高效表达土拨鼠肝炎病毒核心蛋白（WHcAg）的方法并对其B细胞表位进行鉴定。

流行性乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)是一种严重危害人畜健康的虫媒病毒.表面囊膜蛋白(E蛋白)是该病毒的主要结构蛋白.E蛋白在介导病毒与宿主细胞的吸附、融合,决定病毒的血凝活性、细胞嗜性以及决定病毒毒力和诱导宿主产生保护性免疫反应中起重要作用.E蛋白结构域Ⅲ(EⅢ)是诱导中和抗体的重要区域.为确定乙型脑炎EⅢ的抗原表位,实验首先克隆了JEV疫苗株SA14-14-2的EⅢ区域,并用pGEX-6P-1载体进行融合表达,免疫印迹分析表明,该融合蛋白能被抗JEV血清识别.为了进一步对该结构域进行抗原表位作图,设计了14个覆盖该区域且部分重叠的短肽.将各短肽与GST进行融合表达与纯化.短肽融合蛋白经JEV阳性血清免疫印迹和ELISA免疫反应性扫描分析,结果鉴定出,E39(305TEKFSFAKNPVDTGHG320)、E45-1(355VTVNPFVATSSA366)、E48-1(377PFGDSYIV384)和E49(385VGRGDKQINHHWHKAG400)4个线性抗原表位.分别将4个抗原表位融合蛋白免疫小鼠,制备各抗原表位单因子血清,结果经体外病毒中和试验表明,E39为具有病毒中和活性的抗原表位.试验结果为进一步分析JEVE蛋白结构与功能以及诊断试剂和表位疫苗的研究提供了重要工作基础.

土拨鼠肝炎病毒核心蛋白的高效表达和B细胞表位鉴定

摘　要:目的 方法分别构建不同截短型WHcAg的质粒以了解能大量表达并形成WHV核心颗粒的区段，利用变性WHcAg制备单克隆抗体以寻找能与WHcAg线性B细胞表位结合的单克隆抗体。结果 WHcAg前144或149氨基酸残基能够大量表达并能形成颗粒样结构。这2种截短型WHcAg能够在大肠杆菌中表达并组装成直径为34肿的核心颗粒，最终纯化获得毫克级的核心蛋白。截短型WHcAg保留了全长WHcAg的抗原性，而且变性WHcAg存在另外的B细胞线性表位，利用变性WHcAg进行免疫制备单克隆抗体获得的5株抗体均针对WHcAg的N末端表位，该表位在WHcAg和HBcAg高度保守。结论 建立了高效表达WHcAg的方法，制备了针对WncAg单克隆抗体。并对WHcAg的线性B细胞表位进行了鉴定，发现WHcAg和HBcAg的N末端存在共同的线性B细胞表位。