用蔗糖密度梯度离心法进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化，为了研究高等植物细胞质膜上的质子泵ATP酶的作用机理，需要纯化细胞质膜，Hodges等首先使用蔗糖梯度法纯化燕麦根细胞质膜，广泛地应用着，Lundborg等应用水溶性多聚体(PEG/Dextran)两相分配法纯化小麦根细胞质膜后，两相分配法在质膜纯化上逐步引人注意，被认为是一种优于蔗糖梯度法的方法，Lundborg等用两相分配法分。

蔗糖密度梯度离心，将禽脑脊髓炎病毒（AEV）L2Z株、Van Roekel株和1143株分别经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚，接毒后，以4500r/min离心及胰腺，用玻璃匀浆器制成10%的组织悬液。组织悬液经3次反复冻融后，以4500r/min离心15min，取上清液。而后用氯仿处理，取水相，经冷冻真空浓缩，进行不连续蔗糖密度梯度离心。取出含AEV的组分，用PBS稀后超速离心除去蔗糖。亦称平衡密度梯度离心法。用超离心机对小分子物质溶液，长时间加一个离心力场达到沉降平衡，在沉降池内从液面到底部出现一定的密度梯度。若在该溶液里加入少量大分子溶液，则溶液内比溶剂密度大的部分就产生大分子沉降，比溶剂密度小的部分就会上浮，最后在重力和浮力平衡的位置，集聚形成大分子带状物。

利用这种现象，测定核酸或蛋白质等的浮游密度，或根据其差别进行分析的一种沉降平衡法。自1958年米西尔逊（M．Meselson），斯塔尔（F．W．Stahl），维诺格拉德（J．Vinograd）成功地分离了〔15N〕DNA和〔14N〕DNA以来，该法取得许多成果。为得到必要的浓度梯度，多采用浓氯化铯溶液，所以有时也使用氯化铯浓度梯度离心法这个名称，还可采用氯化铷、溴化铯等溶液。通常利用分析超高速离心机，但在将细胞颗粒成分进行分离等以纯化为目的的情况，利用密度差，使用分离超高速离心机，采用预先制备好的蔗糖等的密度梯度。〔2〕采用蔗糖等一些小分子溶液，预先在分离超离心机的样品地内制备出密度梯度，在其上面再加上一层少量的大分子溶液后，离心，大分子就形成层状而沉降。若含有沉降系数不同的许多成分，就会出现许多层。这种情况采用适当的编排号码，取出样品池内的溶液，然后进行研究。

纯化病毒常用的方法是蔗糖密度梯度离心法，能得到比较纯的病毒。其过程如下：

1、将收集的组织或脏器或其他,用玻璃匀浆器充分研磨后制成悬液,经反复冻融3 次后,置- 20 ℃冰箱中,备用。

2、先以5000g离心15分钟后，获取上清夜，然后再20000g高速离心30分钟后取上清液。

3、接着10万g超速离心2h，将沉淀用少量STE溶解。

4、先在超速离心管中加入5-8mL的第3步所获取的含病毒样品的溶解液，然后在离心管中依次加入30 % , 45 % , 60 %的蔗糖,加的时候是用长针头从底部往上加的。11万g离心2.5h,发现在30 %与45 % 以及45 % 与60 %之间都有一条明亮的带，用长针头将两条不同部位的带都吸取出来，分别收集到不同的瓶内。

5、去蔗糖；用STE缓冲液适量稀释纯化的病毒，然后11万g离心3h,用少量STE（根据沉淀的量决定加入多少）缓冲液把沉淀悬起，即最后获得了纯化的病毒。-20度冻纯备用，用时可用分光光度计测定其病毒含量。

用蔗糖密度梯度离心法，进行了禽脑脊髓炎病毒的纯化。将禽脑脊髓炎病毒(AEV)L2Z株、Van Roekel株和1143株分别经卵黄囊接种6日龄SPF鸡胚，接毒后13天，收集脑、消化道及胰腺，用玻璃匀浆器制成10%的组织悬液。组织悬液经3次反复冻融后，以4500r/min离心15min,取上清液。而后用氯仿处理,取水相，经冷冻真空浓缩,进行不连续蔗糖密度梯度离心。取出含AEV的组分，用PBS稀。后超速离心除去蔗糖,得到提纯的病毒，病毒样品经2%磷钨酸负染，于电镜下观察可见典型的病毒粒子，大小为24---28nm。