耐热DNA聚合酶
可抗高温的蛋白质
耐热DNA 聚合酶(Taq DNA 聚合酶):1969年人们从美国黄石国家森林公园火山温泉中分离出一种嗜热的水生真菌Thermusaquaticus,能在70~ 75C生长,从该菌分离纯化得到一种耐热的、依赖DNA 的DNA 聚合酶,简称Taq DNA 聚合酶。
物质特性
耐热DNA聚合酶多。各种耐热DNA聚合酶均发挥作用,但不一定具有3'-5'和5'-3'的外切酶活性。3'-5'外切酶活性可以消除错配,;5'-3'外切酶活性可以消除合成障碍。由于上述这些不同,可以将耐热DNA聚合酶分为两类:
普通型
由一种水生栖热菌yT1株分离提取出,是发现的耐热DNA聚合酶中活性最高的一种,达200,000单位/mg。具有5'-3'外切酶活性,但不具有3'-5'外切酶活性,因而在合成中对某些单核苷酸错配没有校正功能。
TaqDNA聚合酶还要具有非模板依赖性活性,可将PCR双链产物的每一条链3'加入单核苷酸尾,故可使PCR产物具有3'突出的单A核苷酸尾;另一方面,在仅有dTTP存在时,它可将平端的质粒的3'端加入单T核苷酸尾,产生3'端突出的单T核苷酸尾。应用这一特性,可实现PCR产物的T-A克隆法。
2.Tth DNA 聚合酶
从Thermus thermophilus HB8中提取而得,改酶在高温和MnCl2条件下,能有效地逆转录RNA;当加入Mg2+后,该酶的聚合活性大大增加,从而使cDNA合成与扩增可用一种酶催化。
高保真型
1.pfu DNA 聚合酶
是从Pyrococcus furiosis中精制而成的高保真耐高温DNA聚合酶,它不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可校正PCR扩增过程中产生的错误,使产物的碱基错配率极低。PCR产物为平端,无3'端突出的单A核苷酸。
2.Vent DNA 聚合酶
改酶是从Litoralis栖热球菌中分离出的,不具有5'-3'外切酶活性,但具有3'-5'外切酶活性,可以去除错配的碱基,具有校对功能。
应用
DNA序列测定中应用的耐热DNA聚合酶
1.Promega公司测序级TaqDNA聚合酶
是在TaqDNA聚合酶的基础上对它进行修饰,去除5'-3'外切酶活性,保证测序记过的高度准确性,可产生强度均一的测序条带,背景清晰。
2.Bca Best DNA 聚合酶
从Bacillus Caldotenax YT-G菌株中提纯,并使其5'-3'外切酶活性缺失的DNA聚合酶。它的伸长性能优越;可抑制DNA二级结构形成,可以得到均一的DNA测序带。
3.Sac DNA 聚合酶
从酸热浴流化裂片菌中分离,无3'-5'外切酶活性,可用于DNA测序,但测序反应中ddNTP/dNTP的比率要高。
参考资料
最新修订时间:2022-03-21 09:49
目录
概述
物质特性
参考资料