原理:正常
细胞代谢旺盛,其线粒体内的
琥珀酸脱氢酶,可将四唑盐类物质(如 MTT、
XTT、
WST-1等 )还原为紫色的结晶状的物质,沉积在细胞周围,然后通过酶标仪读取
OD值,从而检测到细胞增值状态
原理:
腺苷酸激酶(AK)存在于所有
真核和
原核细胞的
胞浆中,AK具有激活ADP生成
ATP。当细胞受损后,细胞膜发生破损,AK会释放到培养上清中。该试剂盒利用
荧光素酶和荧光素在ATP作用下可以发光,通过
化学发光仪可以定量进行检测。
原理:LDH(
乳酸脱氢酶)是一种稳定的
蛋白质,存在于
正常细胞的
胞质中,一旦细胞膜受损,LDH即被释放到细胞外; LDH催化
乳酸形成
丙酮酸盐,和
INT(四唑盐类)反应形成紫色的结晶物质,可通过500nm酶标仪进行检测。通过检测细胞培养上清中LDH的活性,可判断细胞受损的程度
2、细胞毒性是指该物质对培养细胞的毒性通常用P--388LulZ0
白血病细胞或KB
肿瘤细胞作
体外试验.检验
海洋天然产物的细胞毒性常利用
海胆受精卵观察样品对其细胞分裂的
抑制作用细胞毒性是化学物质(药物)作用于细胞
基本结构和/或生理过程,如
细胞膜或
细胞骨架结构,细胞的新陈代谢过程,
细胞组分或产物的合成、降解或释放,离子调控及
细胞分裂等过程,导致细胞存活、增殖和/或功能的紊乱,所引发的
不良反应。按作用机制可分3种类型:
②选择细胞毒性,存在于某些分化细胞上,主要通过化学物质的
生物转化,与特殊受体结合或特殊的摄入机制所引发;
③细胞特殊功能毒性,对
细胞结构和功能损伤轻微,但对整个机体损伤非常严重。类似
毒性作用可通过
细胞因子、
激素和
递质的合成、释放、结合和降解影响细胞与细胞间的交流或特殊的转运过程而实现。毒性作用也可能来自化学物质对细胞外过程的干扰,任何一种非动物
检测系统对多种因素都应加以考虑。1983年Ekwall提出“基本细胞功能”的概念,即多数化学物质毒性作用是对细胞功能的非特异性损伤,却可引起器官功能的特异性改变甚至机体死亡。
有研究显示化学物质体外细胞毒性与其引起的动物
死亡率及人体死亡的
血药浓度之间都存在良好的
相关性。化学物质产生的损伤和死亡,最终可表现为细胞水平上的改变,由此推测体外细胞毒性可以预测体内
急性毒性。从早期研究至今已有50多年,可预测体内急性毒性的体外系统得到发展。体外细胞毒性和急性毒性之间的
定量研究主要是对RC(Registry of Cytotoxicity)数据库(美国国立职业安全与卫生研究所化学物质毒性作用数据库)中多种化学物质的体外细胞毒性
IC50值及体内急性毒性
LD50值进行
相关分析,获得RC
预测模型,用于急性毒性LD50值预测。利用细胞
毒理学比较多种检测终点、不同组织和种属的预测能力,发现啮齿
动物细胞系对
啮齿动物急性毒性,人源
细胞系对人体急性毒性均有良好的预测能力。BALB/c3T3细胞和人正常
角质细胞(NHK)在验证实验中具有良好的稳定性及预测能力,因此推荐作为细胞毒性分析常用细胞系,其它细胞系及检测终点也可使用。体外方法有助于预测化学物质
急性暴露引发的全身和局部影响,并评估体内毒性浓度。因此进行急性毒性检测前首先进行体外细胞毒性分析,然后根据RC预测模型进行LD50值预测,选择体内急性毒性最适宜的开始剂量,减少
实验动物的使用。