量取500mL水,加热至70℃,加入玉米粉,保持温度在60℃左右约1小时,用纱布过滤后,加入适量的水补足500mL。另取500mL水,加入琼脂,加热使之慢慢融化,过滤后补足水至500mL。两液混合后分装,灭菌备用。
试官分装时,取玻璃漏斗一个,装在铁架上,玻璃漏斗下连接一根乳胶管,乳胶管的另一端连接一细玻璃管,乳胶管上加一止水夹,操作时,用左手拿住空试管中部,并将漏斗下的玻璃管插入试管内,以右手拇指与食指开放止水夹,中指和无名指夹住玻璃管,使培养液直接流入试管内。
装入量视试管大小及用途而定,固体培养基的分装量为管高的1/5左右,用锥形瓶分装培养基时,容量不宜超过容积的一半。注意:不要将培养基沾到管口或瓶口上,以免沾湿棉塞而引起污染。
将加好棉塞的试管4~5支捆扎好,用牛皮纸(或两层报纸)包住管(瓶)口,然后灭菌,做
平板培养基要用的培养皿等,要事先洗净、烘干、包装好,进行干热灭菌。
试管培养基灭菌后,要趁热斜放。先在桌上放一长木板条,然后逐个摆放,使培养基斜面长度为试管长度的2/5至3/5,冷凝后即成
斜面培养基。三角瓶中的培养基可趁热倒入已灭菌的培养皿中,制作平板培养基。方法是:将培养基冷却至45~50℃(低于45℃易凝固,应在水浴锅中加热融化),左手拿培养皿,右手拿三角瓶底部,用左手小指和手掌将三角瓶口的棉塞拔下,并握在手中,灼烧瓶口片刻,在酒精火焰旁将培养皿打开一小缝,使瓶口正好伸入,倾入培养基约15mL,平置、凝固即成。注意:操作者事先必须洗净手,并用70%酒精消毒。