武汉公交540路由武汉市公共交通集团有限责任公司第六营运公司运营，线路的运行区间为武昌火车站东广场至武汉火车站。

【武汉火车站】6:00-21:00

【武昌火车站东广场】6:30-22:00

2018年12月8日，本线路回行中途走向调整为友谊大道、团结大道、高铁北一路至武汉站。

2019年1月31日，因洪山区白云路排水工程施工完毕，本线路回行中途走向恢复为友谊大道、杨春湖路、团结大道、白云路至武汉站。

2023年8月31日，本线路调整中途走向。

投币2元，武汉通或支付宝乘车码1.6元，依据⟪武汉市常规公交换乘优惠实施办法⟫，本线路参与武汉通换乘优惠，也可使用交通联合卡乘车。

去行走向：由武汉火车站经和谐路、杨春湖路、团结大道、信和路、友谊大道、秦园路、团结大道、徐东大街、中北路、中南路、武珞路、丁字桥路、文安街、静安路、福安街至武昌火车站东广场。

回行走向：由武昌火车站东广场经福安街、静安路、文安街、丁字桥街、武珞路、中南路、中北路、徐东大街、团结大道、秦园路、友谊大道、信和路、团结大道、杨春湖路、和谐路、黄鹤路至武汉火车站。

去行：武汉火车站→和谐路白云路→和谐路杨春湖路→杨春湖路地铁杨春湖站→团结大道田家湾→信和路团结大道→信和路北洋桥路→信和路和平港路→友谊大道东方红村→友谊大道工业三路→友谊大道112街坊→友谊大道大洲村→友谊大道钢洲花园→友谊大道钢花新村→友谊大道园林路→友谊大道柴林花园→友谊大道华城广场→友谊大道铁机路→友谊大道才茂街→友谊大道才华街→友谊大道团结村路→秦园中路友谊大道口→秦园中路宏祥路→团结大道秦园东路→团结大道团结新村→徐东大街沙湖路→徐东大街岳家嘴→中北路地铁东亭站→中北路车家岭→中北路地铁青鱼嘴站→中北路周家大湾→中北路地铁楚河汉街站→中北路姚家岭街→中南路中南二路→丁字桥路武珞路口→文安街省直机关工委党校→文安街梅苑小区→静安路文安街→武昌火车站东广场

回行：武昌火车站东广场→静安路文安街→文安街梅苑小区→文安街省直机关工委党校→武珞路丁字桥→中南路地铁中南路站→中北路姚家岭街→中北路地铁楚河汉街站→中北路周家大湾→中北路地铁青鱼嘴站→中北路车家岭→中北路地铁东亭站→徐东大街岳家嘴→徐东大街沙湖路→团结大道团结新村→团结大道秦园东路→秦园中路宏祥路→秦园中路友谊大道口→友谊大道团结村路→友谊大道才华街→友谊大道才茂街→友谊大道铁机路→友谊大道华城广场→友谊大道柴林花园→友谊大道园林路→友谊大道钢花新村→友谊大道钢洲花园→友谊大道大洲村→友谊大道112街坊→友谊大道工业三路→友谊大道东方红村→信和路友谊大道→信和路北洋桥路→团结大道地铁工业四路站→团结大道田家湾→杨春湖路地铁杨春湖站→和谐路杨春湖路→黄鹤路和谐路→武汉火车站