广州公交543路运营于中国广东省广州市越秀区、荔湾区、白云区，隶属于广州巴士集团有限公司第二分公司。

广州公交543路开线于1995年，隶属于广游公司， 早期走向为广州火车站总站到天雄布市总站。

1996年，广州公交543路改由广州市电车公司广游分公司运营。

2006年，广州公交543路改由广州市电车公司第二分公司运营。

2007年3月，走向调整为同德围（粤溪村）总站至逸景翠园总站。

2008年初，广州公交543路走向由同德围（粤溪村）总站至逸景翠园总站改为同德围（上步村）总站至天健装饰城总站。

2008年底，广州公交543路走向由同德围（上步村）总站至天健装饰城总站改为同德围（上步村）总站至天平架总站。

2010年10月下旬，广州公交543路走向由同德围（上步村）总站至天平架总站改为越秀公园总站至石井（庆丰纺织城）总站。

2020年11月26日，广州公交543路增加停靠石槎路（地铁聚龙站）；12月12日，广州公交543路停靠的小坪南站更名为地铁小坪站、石槎路口站更名为地铁石潭站、同德乡站更名为同德乡（地铁同德站）、上步村站更名为上步村（地铁上步站），线路走向由越秀公园总站—石井（庆丰纺织服装城）总站调整为广州火车站（草暖公园）总站—石井（庆丰纺织服装城）总站。

2021年5月30日，广州公交543路往石井（庆丰纺织服装城）总站方向停靠的越秀公园站由停靠②号分站改为停靠①号分站。7月24日，广州公交543路往广州火车站（草暖公园）总站方向增加停靠公共汽车石槎路中站。

2022年5月1日，原属广州公交集团电车有限公司第二分公司的广州公交543路经营权移交至广州巴士集团有限公司电车分公司；7月1日，广州公交543路改由广州巴士集团有限公司第二分公司运营；9月17日，广州公交543路往石井（庆丰纺织服装城）总站方向增加停靠石槎路中站。

2023年6月25日，广州公交543路暂停运营。