定点诱变
在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中特定碱基的技术
定点诱变 (Site-directed mutagenesis),是在体外特异性地取代、插入或缺失DNA序列中任何一个特定碱基的技术,包括盒式取代诱变、寡核苷酸引物诱变及PCR定点诱变等。
基本信息
定点诱变:可将病毒的随机突变纳入人们的规划之中,这一技术可将DNA基因组或RNA基因组的cDNA任何既定部位的核苷酸替换,或者使之缺失,或者插入另一段核苷酸。
方法
为达到这一目的,一般用分子杂交技术,即将含有特定位点变异的寡核苷酸通过分子杂交,导入载体DNA,再转化到载体中扩增杂交DNA,最后根据设计的分子标记,在一定条件下筛选突变株。由于PCR及核苷酸测序技术的日益普及,定点诱变在病毒学的应用更为方便,它可用于确定病毒基因的致病作用,也可用于研制具有免疫学标记的弱毒病毒疫苗等,受到普遍重视。许多病毒还可作为定点诱变所需的载体,根据不同目的可选用痘病毒、腺病毒、疱疹病毒、乳头瘤病毒、披膜病毒等。
在事先不了解特定核苷酸序列功能的情况下,通过定点诱变产物的分析,推测该序列编码的蛋白质性质及功能,这种利用基因序列资料反过来研究动物体内的遗传学效应的手段,称之为 反求遗传学,广泛应用于病毒的遗传变异研究。
参考资料
最新修订时间:2024-05-21 15:07
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概述
基本信息
方法
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