定慧寺巷位于苏州市区东部，东口在官太尉桥塘岸，正对吴王桥，西口在凤凰街北段。巷内有定慧寺，故名。巷内两侧店铺、民居为仿古建筑，路面铺小方石，平整坚实洁净。

定慧寺巷东口在官太尉桥塘岸，正对吴王桥，西出凤凰街北段。巷长294米，宽11米。

巷内有定慧寺，故名。卢熊《苏州府志》等均作王判司巷。《吴门表隐》卷一：“双塔，宋雍熙中判司王文罕建，并舍田五百八十亩。今祀文罕为伽蓝神，兄弟三人并有像。其墓在寺内东隅，家甚高，人不敢近，其地本名王判司巷。”民国《吴县志》除注引《吴门表隐》卷一相关条目外，并注云：“王判司巷即寿宁寺巷，亦即双塔寺前，今名定慧寺巷。同治《志》既著录王判司巷，复别出寿宁寺巷，未免失考。康熙《志》：寿宁寺巷，今名双塔寺前，即此。”《苏州城厢图》等均标定慧寺巷。巷旧时又作寿宁寺巷、双塔寺前，因巷内旧时有双塔寺、定慧寺两寺之故。考之《平江图》，确有两寺并立。右（东）为万岁院（绘双塔于寺后），左（西）为定慧寺。现代学者刘敦帧教授踏勘苏州后，作《苏州古迹调查记·双塔寺概况》，记之甚详。按：清代所建贡院位于双塔寺、定慧寺之间，占地约六亩许。清末取消科举，贡院废为荒场，后于其上建民居，但《苏州城厢图》中仍标作贡院，左右两边仍为庙宇标记。

定慧寺巷南原有小河，名王长河，东起胭脂桥下，西至定慧寺前。旧时便于水路进香及考生赶考。同治三年（1864），清军攻入苏城，原守城的太平军万余人，被屠杀于寺里，死尸抛入王长河内，并予填没。

20世纪90年代初，该巷及其周围作为“37号街坊”改造工程全面整修。巷西口新立花岗石牌坊一座，镌联曰：“名士当年留旧宅，禅门今日尚生辉”，额题“定慧寺巷”。