基因结构重排的机制是一种
DNA双链断裂(double-stand break)的
修复过程,在
等位基因内或等位基因之间,出现了重复单位复杂的转换式移动( conversional transfer)。
DNA双链断裂常发生在靠近
串联重复序列的5’端的重复单位内,形成
DNA分子的两个游离的、突出的单
链末端。但是在修复的过程中,两末端因摆动或错位,没有按照原配对
碱基的位置
复性,出现了两种后果:
一个结果是错位链最末端的碱基率先复性,然后局部合成空缺的碱基,经过修复形成一个或几个插入重复单位。因为是发生在同- DNA分子内的单链插入,故这种基因的转移是一种基因
内转换形式。基因内转换重排可以反复出现,每出现一次就增加一段
插入序列,所以这种错位复性及修复方式在
小卫星座位一般都是增加了重复单位数,如图表示重复单位由原来的7个重复单位突变增加到9个重复单位。
另一种修复的结果更多见,DNA断端的游离单链末端侵入(strand invasion)到对应的
染色单体上的等位基因,与另一条染色单体的DNA发生复性,结果形成了两同源染色单体的基因之间转换式移动。这类单链侵入形式导致异源链合成、延伸,会出现三种不同的后果:
(1)从
重复序列开始的
错配新合成链,多数在达到重复序列的
侧翼序列之前就被DNA
错配修复系统(mismatch repair system)终止,只能形成基因插入转换。图所示侵入链被错配修复体系终止,又回到原单链继续复制过程。此时,该单链上已经插入了来自对应的另一
姐妹染色单体的3个重复单位,由原来7个重复单位突变为10个重复单位。这种被修复系统监测并终止的DNA杂合
双链可能再次分离,开始新一轮的链侵入、合成和单链复性,引起杂合链的再次延长。最后单链缺口被填充,杂合双链区被修复。这种修复后的重排方式最多见。
(2)第二种是以对应同源染色单体的等位基因为
模板合成的错配链一直延伸到小卫星重复序列的
侧翼区,并连同侧翼序列中可能存在的
SNP基因座的碱基变异一起发生了基因间转换,这种重排同时涉及小卫星重复单位和侧翼序列SNP基因座,因此称为基因共转换(coconversion)。共转换的方式相对较少。图2示侵入链以对应同源染色单体为模板延伸至侧翼区的SNP座位,获得SNP座位的C碱基。被修复系统终止后,再回到原来的单链按原来序列继续复制,此时新链的侧翼SNP座位已经是C/G而不是原来的A/T。
(3)第三种结果更少见,即延伸的杂合双链没有终止,越过
串联重复区段,最后形成典型的Holliday连接结构,然后出现
基因间重组交换(crossover)的过程,经过不同的拆分方式形成同源染色单体之间的互换产物,如图所示。
对CEBl (D2S90)小卫星的研究发现,在
配子细胞中,
基因转换和重排引起的
突变率要比传统概念的
配子不等交换突变高70倍,因此认为基因重排是小卫星的
多态性形成的主要原因。男性配子基因转换突变率远高于女性配子,试验
数据显示男性配子突变率13%,女性仅o.4%。对小卫星和侧翼SNP标记的基因共转换观察,也发现转换事件与侧翼SNP的某种
单倍型有明显的关联,推测小卫星序列的基因转换重排可能受到侧翼
DNA序列的调节。
基因组重排技术结合了传统诱变技术和
细胞融合技术,是一项对整个微生物
基因组重排的新型育种技术。基因组重排技术通过多亲本
原生质体递归融合,可以使
工程菌快速获得多样复杂优良表型,并且无须了解其
基因组学、
代谢组学等具体背景。介绍了基因组重排技术的过程及应用,展现了基因组重排技术的优点,并给出了基因组重排技术的发展在未来的应用情景。