双缩脲试剂是一种用于鉴定蛋白质的分析化学试剂。它是一种碱性的含铜试液，呈蓝色，由0.1g/mL氢氧化钠或氢氧化钾、0.01g/mL硫酸铜和酒石酸钾钠配制而成。

双缩脲试剂A是质量分数为0.1g/mL的NaOH水溶液；

双缩脲试剂B是质量分数为0.01g/mL的CuSO4水溶液.

先在待测液中加入双缩脲试剂A 3mL，振荡均匀（营造碱性环境），再加入1～2滴双缩脲试剂B，振荡均匀。如果待测液里含有蛋白质，那么会看到溶液变成紫色。具有两个或两个以上肽键的化合物皆可与双缩脲试剂产生紫色反应。

蛋白质的肽键在碱性溶液中能与Cu2+络合成紫色的络合物。颜色深浅与蛋白质浓度成正比。

在使用双缩脲试剂时候，必须注意，必须是先加0.1g/mL氢氧化钠溶液，再加0.01g/mL硫酸铜的水溶液。若先加入硫酸铜溶液，再加入氢氧化钠溶液，则无法充分制造碱性环境，此时CuSO4会与NaOH发生复分解反应，生成蓝色氢氧化铜沉淀，导致现象不清，无法较好地达到实验目的。

双缩脲（NH2CONHCONH2）是两个分子脲经180℃左右加热，放出一个分子氨后得到的产物。

双缩脲试剂是由双缩脲试剂A和双缩脲试剂B两种试剂组成。

双缩脲试剂A的成分是氢氧化钠的质量分数为0.1g/mL的水溶液；

双缩脲试剂B的成分是硫酸铜的质量分数为0.01g/mL的水溶液。

双缩脲试剂可以验证蛋白质的存在，遇蛋白质产生紫色。

简单的说，双缩脲是一种化学物质，而检测蛋白质用的那两个试剂之所以叫双缩脲试剂，是因为检测原理和双缩脲的形成相似。

优点：双缩脲法测定蛋白质的测定范围是1~10mg蛋白质，操作简单、快捷。既适合手工操作，又适合自动化分析，重复性好、线性关系好， 双缩脲试剂可以长期保存（ 若贮存瓶中有黑色沉淀出现，则需要重新配制）。

缺点：灵敏度差，测定范围窄，样品需要量大，不同的蛋白质产生颜色的深浅相近，因此它常用于需要快速，但并不需要十分精确的蛋白质测定。干扰测定的物质包括有：在性质上是氨基酸或肽的缓冲液，如TrIs缓冲液，因为它们产生阳性呈色反应，铜离子也容易被还原，有时出现红色沉淀。