DNA半保留复制是:DNA在进行复制的时候链间氢键断裂,
双链解旋分开,每条链作为模板在其上合成
互补链,经过一系列酶(
DNA聚合酶、
解旋酶、链接酶等)的作用生成两个新的
DNA分子。
术语解释
子代
DNA分子其中的一条链来自亲代DNA,另一条链是新合成的,这种方式称半保留复制。
半保留复制的意义:遗传稳定性的分子机制。
主要特征
从美国科学家沃森(J.D.Waston)和英国科学家克里克(F.Crick)建立
DNA结构的
双螺旋模型开始,关于
DNA复制原理的轮廓就已经诞生,正如他们二人给《Nature》杂志的第一封信中所写:“我们并没有忽视,从我们所架设的特异的配对方式可以提出一个关于
遗传物质可能的复制机制的建议来”。然而,实际的过程却远为复杂,人们对于复杂的DNA复制过程还没有了解清楚。DNA复制过程的复杂性在于:
(4)复制过程必须设计若干安全保障以防止复制的错误,并纠正已发生的错误(尽管极少);
(5)巨大的
DNA分子特别是环形分子给复制带来许多
几何学的问题,比如E.coli
复制速度为105bp/分,如果DNA模板以此速度
解旋的话,则相当于每小时开70英里的汽车引擎转动的速度;
(6)对于所有含有双螺旋DNA的生物
有机体,并没有单一的可以普遍适用复制的机制。然而,各种生物的DNA复制还是有共同点的,例如新生的DNA链总是按A、T,G、C这样的碱基配对规律与母体互补,新生的DNA链的单体总是由
DNA聚合酶一个一个地加在这条新生链的3'-
OH末端。
沃森和克里克最早提出DNA的半保留复制机理,就是在复制过程中各以双螺旋DNA的其中一条链为
模板合成其
互补链,新生的互补链与
母链构成子代
DNA分子。
这一假说于1957年得到Matthew Meselson和Franklin Stahl所设计的精巧的实验所证实。
这一实验有力地支持了半保留复制的假说,它不但否定了全保留复制假说,而且也排除了弥散复制假说。所谓弥散复制就是说子代DNA的每一条链都是由亲本链的片断与新合成的片断随机拼接而成。
很多实验都证明了复制是从DNA分子上的特定位置开始的,这一位置叫复制原点,常用ori或O表示。例如
大肠杆菌的复制原点位于ilv基因附近,是一个包括大约245bp的一个区段。现已证明,除fd组的
噬菌体以外,许多生物的复制原点都是双螺旋DNA
呼吸作用强烈的区段,即经常开放的区段(frequently opening region),亦即富含A·T的区段。这一区段产生的瞬时单链与ssb蛋白(single-stranded DNA binding protein)结合,对复制的起始十分重要。在所有的
原核生物中,复制都是从特定的位置开始的,迄今尚未发现例外。
复制原点的性质所决定DNA复制从特定位置开始,大多数双向进行,也有一些单向的,或以不对称的双向方式进行的。
用
遗传学方法可以证明E coli的复制是从ilv基因附近开始,以双向等速进行复制的。
细菌染色体复制一次的时间相当于细胞繁殖一代所需要的时间。利用温度
突变种能使DNA复制同步进行。这种突变在25℃时能正常繁殖,而在42℃时虽能完成复制之中的
DNA合成,但不能开始新的一轮复制。如果每个细菌从原点同时开始复制,在一定时刻,靠近复制原点的
基因复制得多些,而远离复制原点的基因就复制得少些。假如复制是单向进行的,
基因频率在
基因图上呈单向梯度,最高频率的基因和最低频率的基因应该是连锁的(因为是
双链环状染色体)。如果是
双向复制,基因频率将以O点为中心出现双向梯度。测定了E-coli的许多基因频率,发现是以ilv为中心双向下降。这说明E coli的复制原点在ilv基因附近。
噬菌体μ能插入
大肠杆菌染色体上不同的位置,而噬菌体λ只能插入一个特定的位置。在
对数生长期可以测定噬菌体μ和k的数量。实验结果表明,噬菌体μ插入到ilv附近,不论是在右边或左边,相对产量都是最高,而插入ilv的180°的位置,产量最低。从这个实验可以得出结论:E.coli
DNA的复制从ilv基因开始,双向等速进行,用
放射自显影方法也可以得到有关复制原点和方向的资料。
用
电子显微镜观察
噬菌体T7DNA复制,总是在离一端17%处出现一个复制眼,然后向两边伸展。实验表明,
真核生物DNA的复制也是从特定位置开始,以双向等速进行,只不过是一个
DNA分子上有许多个特定的复制原点。
也有一些例外的情况。例如在
枯草杆菌中,复制从原点开始双向复制,但两个
复制叉的移动不对称,一个移动1/5的距离便停下来,然后另一个复制叉走完4/5的距离。
质粒R6K复制的早期是单向进行的,可是这一复制叉在离起点1/5处停下来,然后从相反的方向启动第二个复制叉。
线粒体DNA的复制也是不对称的,DNA双链中的一条先复制成双链环态,而另一条亲本链被置换出来成为单链状态,叫做置换噜噗,又叫D噜噗(displacement loop)复制67%,另一条链才开始复制。这一复制方式的
生物学意义还不太清楚。
质粒ColE1的复制完全是单向的。从体内或体外系统中分离到的
复制中间体,其一个“
复制叉”(其实就是复制原点)总是离开
EcoRI切点17%左右,而另一个复制叉离开EcoRI切点的距离却是可变的。因此ColEI的复制是从特定位置开始,
单方向进行。
DNA半保留复制运用的游离的某一种碱基遵循2的n次方-1。