切口平移_切口产生3‘羟基和5’磷酸基团

切口平移

切口产生3‘羟基和5’磷酸基团

切口平移（nick translation）是切口产生3‘羟基和5’磷酸基团，DNA延伸合成3‘端，5’端被小片段降解，缺口位点沿着双链向3‘端移动，是在体外向DNA分子引入放射性标记核苷酸的技术。

简介

切口平移法的缺点：1.放射物质摄入率较低；2.长时间反应后在DNA Pol I的外切酶活性的作用下，将已经掺入的放射性物质游离下来，降低了摄入率；3.必须有高纯度的模板DNA；4.反应后必须除去未反应的放射性dNTP。

操作步骤

1、用DNase I处理双链DNA，使之随机产生单链断裂。

2、DNA聚合酶I的5‘-3’外切酶活性从断裂处5‘除去一个核苷酸，同时5‘-3'聚合酶活性将一个放射性核素标记的单核苷酸引入到断裂的3'端。

3、反应重复进行，结果标记的核苷酸代替了原来的核苷酸残基，形成了放射性的DNA分子。

参考资料

最新修订时间：2023-07-21 21:40

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概述

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