产甲烷菌,是
专性厌氧菌,属于
古菌域,广域古菌界,宽广
古生菌门。产甲烷菌是一类能够将无机或有机化合物
厌氧发酵转化成甲烷和二 氧化碳的古细菌。产甲烷菌是重要的环境微生物,在自然界的碳素循环中起重要作用。迄今已有 5种产甲烷菌基因组测序完成。基因组信息使人们对产甲烷菌的细胞结构、进化、代谢及环境适应性有了更深的理解。已知的甲烷生物合成途径有3种,它们以乙酸、甲基化合物、氢/
二氧化碳为起始,通过不同的反应途径都形成了甲基辅酶M,在甲基辅酶M还原酶的催化下最终形成甲烷。1974年《伯杰氏细菌鉴定手册》(第八版)中将其归属于1科、3属、9种。截至1992年已发展为3目、7科、19属、70种。截至2009年已发展为5目、12科、31属。
简介
产甲烷菌是一类能够将无机或有机化合物
厌氧发酵转化成甲烷和
二氧化碳的古细菌。产甲烷菌是重要的环境微生物,在自然界的碳素循环中起重要作用。
1979年,Balch和Wolfe通过16S rRNA测序 将产
甲烷菌发展为3目(甲烷杆菌目、甲烷球菌目、甲烷微菌目)4科7属14种。1993年,Boone将甲烷八叠球菌科上升为一个目,建立了
火热产甲烷菌目,至此产甲烷菌发展为5目10科25属59种。2001年,Bergey's Manual of Systematic Bacteriology将产甲烷菌放在宽广古生菌门(Euryarchaeota)中,至此产甲烷菌发展为3纲,5目,10科,26属,78种。产甲烷菌属于
古菌域(Archaea),广域古菌界(Euryarchaeon),宽广
古生菌门(Euryarchaeota)。人们对产甲烷菌的认识约有150年的历史。人们对产甲烷菌有极大的兴趣是在于产甲烷菌对天然气的形成,在自然界与
水解菌和产酸菌等协同作用,使有机物
甲烷化,产生有经济价值的
生物能物质——甲烷。
分类
产甲烷菌是严格厌氧的微生物,在严格厌氧技术发明之前,产甲烷菌的
分离培养研究进展缓慢。
巴氏甲烷八叠球菌(Methanosarcina barkeri)和
甲酸甲烷杆菌(Methanobacterium formicium)是最早分离出的产甲烷菌微生物;1950 年 Hungate 厌氧分离技术的使产甲烷菌的研究得到迅速的发展。1974年《伯杰氏鉴定细菌学手册》第八版以产甲烷菌的形态作为分类依据,将其描述为一个独立的科。第九版《伯杰系统细菌学手册》中产甲烷菌的分类以系统发育的方法划分,包括 5 个大目:甲烷杆菌目(Methanobacteriales)、甲烷球菌目(Methanococcales)、甲烷 八 叠 球 菌 目(Methanosarcinales)、甲 烷 微 菌 目(Methanomicrobiales)和甲烷火菌目(Methanopyrales)(Liu and Whitman, 2008; 陈森林, 2010),每个目的产甲烷菌包含多个科属,现已命名的 10 科、31 属分属上述5个目的产甲烷菌。
近年来,随着厌氧分离技术的改进,结合先进的鉴定手段和分析方法,更多种类的产甲烷菌菌株被鉴定出来。在分类学上,产甲烷菌被分别描述为甲烷杆菌纲(Methanobacteria)、甲烷球菌纲(Methanococci)、甲烷微菌纲(Methanomicrobia)和甲烷火菌纲(Methanopyri),这4 个纲包括 7 目、14 科、35 属。其中甲烷微菌纲(Methanomicrobia)有 4目、9科、25属,是研究最多的产甲烷微生物类群。
甲烷生成途径研究
甲烷的生物合成有 3 种途径,包括以乙酸为底物,以 H2/CO2 为底物,以甲基类化合物为底物的生物合成过程。研究表明,以乙酸盐为底物产生的甲烷占自然界甲烷量的 67%,而以 H2/CO2转化形成的甲烷不足自然界甲烷量的33%。很多独特的酶类参与甲烷生成过程,这些酶类主要有氢化酶、辅酶F420、甲酰甲基呋喃、甲酰四氢甲基喋呤、辅酶 M 等,通过监测产甲烷过程中的独特酶类,可以从本质上认识产甲烷菌的代谢规律。三种甲烷合成途径最终都形成甲基辅酶 M,甲基辅酶 M 在甲基辅酶 M 还原酶Ⅰ (MCR Ⅰ)和甲基辅酶 M 还原酶Ⅱ (MCR Ⅱ)的催化下最终形成甲烷。
细胞结构
产甲烷菌的细胞结构:细胞封套(包括
细胞壁、
表面层、鞘和
荚膜)、
细胞质膜、
原生质和
核质。
产甲烷菌有
革兰氏阳性菌和
革兰氏阴性菌,它们的细胞壁结构和化学组分有所不同。也是与
真细菌的区别点。
细胞封套有四种:
1.大多数G+产甲烷菌的细胞壁在结构上与G+真细菌相似,细胞壁有一层和三层的,单层的厚度为10~20nm,如
甲烷杆菌属与
甲烷短杆菌属。巴氏甲烷八叠
球菌的细胞壁只有一层,厚约200nm。它们化学成分与G+真细菌的不同,不含细胞壁(即不含二胺基庚二酸或细胞酸)而是假细胞壁质或是未硫酸化的异多糖。三层的细胞壁壁厚为20~30nm,有内层、中层和外层。外层在细胞分裂横隔形成时消失,如
瘤胃甲烷短
杆菌。
2.G+的炽热高温甲烷菌的
细胞壁外有一层六角形的
蛋白质亚基即S层覆盖。
3.G-产甲烷菌不具有球囊多聚物或外膜。只有一层六角形或四角形的,由蛋白质亚基或
糖蛋白亚基组成的S层。
4.甲烷
螺菌的
细胞质膜外只有一层由蛋白纤维组成的鞘包裹几个细胞。其厚度为10nm。
生理特性
1.营养特性:甲烷细菌的能源和碳源物质主要有5种,即H2/CO2、甲酸、甲醇、甲胺和乙酸。
2.特殊辅酶:F420:是黄素单核甘酸的类似物,分子量为630的低分子量荧光化合物。它是
甲烷细菌持有的辅酶,在形成甲烷过程中起着重要作用。
其特点:(1)当用420nm波长的紫光照射时,能产生自发蓝绿荧光,这一现象可借以鉴定甲烷细菌的存在。(2)中性或碱性条件下易被好氧光解,并使酶失活。
其特点:(1)它是甲烷细菌独有的辅酶,可借以鉴定甲烷细菌的存在。(2)它在甲烷形成过程中,起着转移甲基的重要功能。(3)其具有RPG效应。即促进CO2还原为CH4的效应。
3.环境条件:
氧化还原电位:参与中温消化的
甲烷细菌要求环境中应维持的氧化还原电位应低于一350mV;对参与高温消化的甲烷细菌则应低于-500~-600mV。
温度:低温菌的适应范围为20~25°C,中温菌为30~45°C,高温菌为45~75°C。
pH:大多数中温
甲烷细菌的最适pH值范围约在6.8~7.2之间。
毒物:凡对
厌氧处理过程起抑制或毒害作用的物质,都可称为毒物。
培养方法
产甲烷菌是
专性厌氧菌,它分离和培养等的操作均需要在特殊环境和用特殊的技术进行。
培养方法分类
一般要求不高的可用在液面加石蜡或液体石蜡的液体深层培养法、抽真空的培养法、在封闭培养管中放入焦性没食子酸和碳酸钾除去氧的培养方法(Berker)、Hungate的厌氧滚管法、Hungate的厌氧液体培养法、Balch的厌氧液体培养增压法等。
具体方法介绍
最好的是厌氧手套箱,它由四部分组成:
1.附有手套的密闭透明薄膜箱
2.附有两个可开启的可抽真空的金属空气隔离箱
3.真空泵
利用厌氧手套箱可做许多工作,如:分装
厌氧培养基,倒制平板,离心
厌氧微生物收集菌体,对氧敏感的酶和辅酶的
分离纯化,进行
电泳、厌氧性生物化学反应和遗传学研究等。