PAS染色法(Periodic Acid-Schiff stain)在
组织学上,主要用来检测组织中的糖类。过
碘酸把糖类相邻两个碳上的
羟基氧化成
醛基,再用Schiff试剂和醛基反应使呈现紫红色。
原理:过碘酸能使细胞内的多糖
乙二醇基氧化成二醛,再与Schiff氏液的无色品红结合,红色,定位于胞浆上。
过碘酸(HIO4·2H2O) 0.4g 95%酒精 35ml M/5
醋酸钠(2.72g+
蒸馏水100ml) 5ml蒸馏水10ml。
0.5克
碱性品红加入100毫升蒸馏水中,时时摇动三角瓶5分钟,使之充分溶解。冷却至50℃后过滤加入10毫升1N盐酸,冷却至25℃,加入0.5-1克偏重硫酸钠,在室温中至少静置24小时,然后密封冰箱保存。
4) 亚硫酸水 1%
偏重亚硫酸钠10ml 1N HCI 10ml 蒸馏水 180ml的树胶溶解。
1. 石蜡切片脱蜡至水(细胞涂片,冰冻切片直接水洗);
2. 蒸馏水洗;
3. 过碘酸酒清液10min;
4. 自来水冲洗10min;
5. Schiff氏液10min;
6. 流水冲洗5min;
8. 流水冲洗5min;
9. 常规脱水、透明、封固。
煮沸后,待片刻,加入碱性
品红,振荡数分钟使品红溶解,冷至50℃加入1M的盐酸20ml,混匀。待冷却至25℃加入
偏重亚硫酸钠0.5g,混合,置于带塞的棕色瓶中,放于暗处24小时,染液为无色,如为微红则加活性炭1-2g,混合过滤,如过滤液仍有红色,应再加少许活性炭,时红色完全被吸收为止。制成后置于棕色瓶内保存在冰箱备用,如变为红色,则不能使用。
将苏木素溶于95%的乙醇,钾明矾溶于水(可加热),然后将苏木素液加入明矾液中混合,用强火煮沸后加
氧化汞0.5g,迅速搅拌,成深紫色,迅速移入冷水中,次日过滤,临用时取此液95ml加冰醋酸5ml,可使细胞着色清楚。
阳性反应,胞浆呈红色,阴性反应,胞浆呈无色;在正常血片中RBC不染色;PLT染成深红色;
中性粒细胞胞浆染成红色或深红色,有些细胞有阳性颗粒;
单核细胞的胞浆染成淡红色,可含有细小或粗大阳性颗粒;少数
淋巴细胞的胞浆内含有少许小的淡红色或红色颗粒;正常骨髓的
幼稚细胞和有核
RBC都不染色;
巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。巨核细胞的胞浆内呈弥散红色或深红色。
随着
医学实验技术的发展,糖原染色应用的范围更加广泛,如用以证明与鉴别细胞内空泡状的性质 ,心肌病变及其他
心血管疾病的诊断 ,
糖原累积病诊断和研究 ,糖尿病的诊断和研究 ,用于某些肿瘤的诊断等。除用于
糖原的鉴定和黏液的显示外 ,还可以观察
肾小球基底膜 、结肠杯状细胞 中性黏液物质 、
阿米巴滋养体和霉菌的着色。
临床诊断、分类和治疗提供 了重要的依据。