大肠杆菌的
DNA聚合酶Ⅰ经过
枯草杆菌蛋白酶（或
胰蛋白酶）处理后，原来的酶分子切成两个片段，其中大片段分子质量为76kD，小片段分子质量为34kD。该大片段通常称为Klenow片段，通过
克隆技术也可以获得Klenow片段。
大肠杆菌
DNA聚合酶Ⅰ的Klenow片段是完整的DNA聚合酶Ⅰ的一个片段，只有5’→3’聚合酶活性和3’→5’
外切酶活性，失去了5’→3’外切酶活性。它可用于填补DNA单链末端成为
双链。
如果供给32P标记的三磷酸
核苷酸，则可使DNA带上
同位素标记。当用
交错切割的
限制酶切成带有单链
粘性末端的DNA片段，要用被切成
平头末端的DNA片段连接时，可以先用Klenow片段使粘性末端的单链补齐成为平头，然后在
DNA连接酶作用下把两个DNA片段连接起来。