IMViC试验,靛基质(吲哚、I)实验、
甲基红(MR、M)实验、二乙酰(VP)实验、柠檬酸盐利用(C)试验的合称缩写,常用于鉴定
肠道杆菌。尤其对形态、
革兰染色反应和培养特性相同或相似的细菌更为重要(主要用于鉴别
大肠杆菌和
产气肠杆菌,多用于水的细菌检验)。
IMViC是
吲哚试验( indol test)、甲基红试验( methyl red test,简称MR试验)、V-P试验( Voges一Prokauer test)和柠檬酸盐试验( citrate test)4个试验的缩写(i是在英文中为了发音方便而加上去的)。这四个试验主要用来快速鉴别
大肠杆菌和
产气肠杆菌等肠道杆菌科的细菌,多用于食品和饮用水的
细菌学检验。
试验方法
靛基质(吲哚)试验
用于检测细菌能否分解色氨酸产生吲哚(靛基质)的能力。有些细菌,如大肠杆菌能产生色氨酸水解酶,分解蛋白胨中的色氨酸产生吲哚和丙酮酸。吲哚与对二甲基氨基苯甲醛结合,生成红色的,为阳性反应,而产气肠杆菌为阴性反应。
某些细菌有
色氨酸酶,能分解
蛋白胨中的色氨酸形成
吲哚(靛基质),吲哚能与对二甲基氨基苯甲醛作用生成玫瑰吲哚而呈红色。
色氨酸水解反应: 色氨酸+H2 O→吲哚+NH3+CH3COCOOH
吲哚与对二甲基氨基苯甲醛反应: 吲哚+对二甲基氨基苯甲醛→玫瑰吲哚
甲基红(MR)试验
检测细菌能 否分解葡萄糖产生有机酸的能力。当细菌代谢糖产生有机酸时,使加入培养基中的甲基红指示剂由橘黄色(pH 6.3)变为红色(pH4.2),即甲基红反应。例如,大肠杆菌先发酵葡萄糖产生丙酮酸,丙酮酸再被分解为有机酸(甲酸、乙酸、乳酸琥珀酸等),由于产酸量较多,使培养基的pH降至4.2以下,此时加入甲基红指示剂呈红色,为阳性反应;而产气肠杆菌分解葡萄糖产生有机酸量少,或产生的有机酸又进一步转化为非酸性末端产物(如醇、醛、酮、气体和水等) ,使pH升至大约6.0,此时加入甲基红指示剂呈黄色,为阴性反应。
某些细菌在
糖代谢过程中,分解葡萄糖产生
丙酮酸,丙酮酸进一步被分解成为
甲酸、乙酸、
琥珀酸等,使培养基pH下降至4.5以下,加入
甲基红指示剂可呈红色。如细菌分解葡萄糖产酸量少,或产生的酸进一步转化为其他物质(如醇、醛、酮、气体和水),培养基pH在5.4以上,加入甲基红指示剂呈橘黄色。本试验常与V-P试验一起使用,因为前者呈阳性的细菌,后者通常为阴性。
取一种细菌的24h培养物,接种于
葡萄糖蛋白胨水培养基中,置37℃培养48~72h,取出后加
甲基红试剂(甲基红0.02g,95%酒精60mL,
蒸馏水40mL)3~5滴,立即观察结果。如果培养液呈红色者为阳性,橙色者为可疑,黄色者为阴性。
培养液呈红色者为阳性,橙色者为可疑,黄色者为阴性。
V-P试验
用于检测细菌能否利用葡萄糖产生非酸性或中性末端产物的能力。某些细菌,如产气肠杆菌分解葡萄糖产生的丙酮酸又进行缩合、脱羧生成乙酰甲基甲醇(3 -羟基丁酮) ,此化合物在碱性条件下易被空气中的氧气氧化成二乙酰(丁二酮),二乙酰与培养基蛋白胨中精氨酸的胍基作用,生成红色化合物,即V - P试验阳性反应;而大肠杆菌不产生红色化合物,为阴性反应。若在培养基中加入α-紫酚或少量肌酸(0.3%)、肌酐等含胍基的化合物,可加速此反应。
葡萄糖→丙酮酸→乙酰乳酸→乙酰甲基甲醇→2,3丁二醇→二乙酰→胍基→红色化合物
试验时强阳性者约于5min后,可产生粉红色反应。如长时间无反应,置室温过夜,次日不变者为阴性。
柠檬酸盐试验
用于检测
肠杆菌科各属细菌能否利用柠檬酸的能力。有的细菌,如
产气肠杆菌等能够利用
柠檬酸钠为碳源。由于细菌不断利用柠檬酸产生CO2,CO2与培养基中的Na+↑、H2O结合形成碳酸钠,导致培养基碱性增加,使培养基中溴麝香草酚蓝指示剂由绿色(pH6.0~7.0)变为蓝色(pH大于7. 6),即为阳性反应;而大肠杆菌不能利用柠檬酸盐,即为阴性反应。
当细菌利用铵盐作为唯一
氮源,并利用枸橼酸盐作为唯一
碳源时,若细菌能利用这些盐作为氮源和碳源而生长,则能利用
枸橼酸钠产生碳酸盐,从而与利用
铵盐产生的氨反应,形成
NH4OH,使培养基呈碱性,使
指示剂溴麝香草酚蓝(BTB)由淡绿转为深蓝。
实验结果