小离子电量:0.88~1.08meg/dg(dg=dry gram,千克重)。正常
PH范围:2~9.5,蛋白容积:425mg/dg(蛋白体积是指0.01M ph8.5
磷酸缓冲液—
牛血清白蛋白),蛋白容积/柱体积:60mg/ml每升所需的
离子交换剂㎏,
柱床体积:0.19(离子交换剂重量的数字考虑到溶胀,容易去除及使用过程中离子
离子交换剩余颗粒),填料密度的状态为0.05M PH7.5磷酸缓冲液。
称取IgDEAE32或52,放入5ml
量筒中,加
蒸馏水浸泡过夜,观察溶胀后DEAE的体积。根据所需
层析柱的
柱床体积计算所需DEAE的用量,称取所需DEAE用
蒸馏水浸泡过夜,其间换几次水,每次除去细小颗粒。抽干,改用0.5
mol/LNaOH溶液浸泡1h以上,抽干(可用布氏漏斗),用无
离子水漂洗,使pH至8左右(用
pH试纸检查)。再改用0.5mol/LHCl溶液浸泡1h以上,去酸溶液,用无离子水洗至pH6左右。本实验中在用前应以0.0175mol/L,pH6.7
磷酸盐缓冲液,浸泡平衡后使用。
用过的
离子交换剂可以反复使用,使其恢复原状的方法俗称“再生”。再生并非每次用酸、碱反复处理,通常只要“转型”处理即可。所谓转型就是使交换剂带上所希望的某种离子,如希望
阳离子交换剂带上NH+4则可用
NH4OH浸泡,如希望
阴离子交换剂带上
Cl—则用
NaCl溶液处理。本实验中DEAE—纤维素在酸碱处理后,用0.0175mol/L,pH6.7磷酸盐缓冲溶液浸泡即可转型,以HPO4取代DEAE中的
OH—。一般由于DEAE—纤维素使用后因带有大量杂蛋白,所以再生时,先用0.5mol/L
NaOH浸洗,用去离子水洗至pH8左右,再转型,即可再使用。