BrdU是另外一种
胸腺嘧啶核苷类似物。它也能够在
细胞增殖时期代替
胸腺嘧啶(T)渗入正在复制的
DNA分子,通过基于EdU与Apollo
荧光染料的
特异性反应检测
DNA复制活性,通过检测EdU标记便能准确地反映细胞的增殖情况。
可代替
胸腺嘧啶在DNA合成期(
S期),活体注射或
细胞培养加入,而后利用与Apollo荧光染料特异性反应检测细胞增殖情况。同时结合其它
细胞标记物,双重染色,可判断
增殖细胞的种类,
增殖速度,对研究
细胞动力学有重要意义。
EdU检测
染料只有BrdU抗体大小的1/500,在细胞内很容易扩散,无需
DNA变性(酸解、热解、
酶解等)即可有效检测,可有效避免样品损伤,在细胞和组织水平能更准确地反映
细胞增殖等现象。而BrdU需要变性
DNA后才能与抗体结合,破坏了DNA
双链结构,影响了Hochest等染色,导致染色弥散,
准确性降低等问题(图2),逐渐被EdU取代。
这类碱基替代物可以标记
细胞分裂产生的
时间点。因此,分时掺入BrdU和EdU可以做
双标染色观察到不同的时间分裂的细胞。比如:用第一天
给药BrdU,第二天给药EdU,之后染色观察到,BrdU阳性的细胞就代表了第一天的,类似的EdU代表第二天。